159228. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11,16a, 17a-trihidroxiszteroidok előállítására
159228 10 20. példa: 1ßo-Hidroxihidr okortizon Curvulariia lunatát i(ATOC 12 017) tenyésztünk 5 7 napig 25°-on a következő összetételű ferde agar táptalajon: agar 20 g glukóz 10 g 10 élesztőkwonat 2,5 g dákáliumhidrogénfoszfát 1 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. A táptalajt 30 percig 121°-on sterilizáljuk. 15 A táptalaj felületéről kapott oltóanyaggal beoltunk 100 ml következő összetételű táptalajt egy 500 volles Erlenmeyer-lombikban: kukoricalekvár 6 g amimóniumdihidrogénfoszfát 3 g élesztőkivonat 2,5 g glukóz 10 g kaDciuimfoarbanát 2,5 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre 20 25 40 A pH 2 n nátronüúggal 7,0-ra beállítva. A táptalajt 30 percig 121°-on sterilizáljuk. A beoltott lombikot 25°-on 38 órán át inkubáljuk egy forgó rázógépen (5 cm átmérő, per- 30 cenként 280 fordullat). A fermentlóből 5 tf%r ot átviszünk egy második 500 ml-es lombikba, • amely 100 ml ugyanilyen összetételű táptalajt tartalmaz, és a második lombikot ugyanúgy inkubáljuk, mint az elsőt. Az 1. példa szerint 35 készült 16«-hidroxi-tortexolon 16,17-cikloborát-fcálunilsó oldatot adunk a táptalajhoz a harmadik órában olyan mennyiségben, hogy a 16«-hidroxi-kortexoílon koncentráció 1000 /^g/ml legyen, és újabb adag szteroid-oldatát a 24. órában 1000 jug/inl 16«-tódroxtJkartexolonnak megfelelő mennyiségben, úgyhogy az összes adalék 2000 /xg/ml 16a-hidroxi-4íortexolönnak felel meg. A képződött li6«-hiidroxi-ihidrokiortizon menynyiségét úgy határozzuk meg, hogy az egész 45 fermentllé alikvot mennyiségét híg kénsavvá] 2,5 pH-ra állítjuk be, desztillált vízzel hatszorosára hígítjuk, a hígított fermentíéből 5,0 ml-t 2,0 ml metilizofoutilketonnal extrahálunk, és a mietilizdbutilketonos kivonatot papírkramiatogr 50 rafáljuk. A 48. órában 16«4ndroxihiidrokQrtizon az egyedien kimutatható szteroid. A ferrnientlében kb. 1,500 /tg 16a-hidroxi-jhidrokortizon/ml koncentráció, vagyis kb. 75 tf% átalakulás mutatható ki. 55 Az 1. példában leírt módon 1,5 g terméket tartalmazó 1 liter teljes fermentléből 740 mg átkristályosított löa-tadroxi-hMrokortizont kapunk. Viszont, ha a 20. példa szerint járunk el, de a cikldborátészter helyett szalbad 16«-hidroxi-kortexolonból indulunk ki, azt találjuk, hogy legfeljebb 300 ^g/ml 16«~hidraxi-ko! rtexolon-komaenitráoiót érhetünk él, és a maximális hozam kb. 20% 14 óra alatt. 21. példa: A 20. példában leírt módon eljárva, de C. lunata helyett Condothyrium hellebori ATCC 12 522-4 használva, a lßa-Jhadroxi-kortexolon 16,17-ciklaborátésZtere szintén átalakul 16«-hidroxihidrokortizonná. Hasonlóképpen a következő mikroorganizmusok is átalakítják a 16«-hidroxi-feortexolon 16,17-cikloborátésizterének káliumsóját 16«-mdroxi~hidrokoirtizonná: Chae'tomella oblonga, Doithichiza ferruginosa, Spondyloohadium austeile, Cunnänghamela blakesleeana, Rhodoseptoria sp., Pyenosporium sp., Staohylidium biicölor, Botrytis cinerea, Colletotrichum phomoides vagy Corticium sasaki. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a 11-helyzetfoen szubszitituáiatlan 16«,17«-'dihid!roxiszteroiddkmak 11«- vagy 11/?-hidroxíilozó mikroorganizmusokkal végzett enzimatikus fermentálással 11«16«,17«- vagy 11^,-16«,17«-trihidroxiiszárniazékokiM: való átalakítására azzal jellemezve, hogy szubsztrátumként a 11-helyzetben szubsztiituállatlan 16«,17«-diíhidroxiszteroiddk vízben oldható ll6,17-cikloborát>észtierét használjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy szteroid szubsztrátumként a ll^sizubsztituálatl! an-16«,17«-dülhidroxiipregnán sorozlatbeli szteroidok vízben oldható 16,Jl7-cilkloborátészterét használjuk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganátosítási módja azzal jellemezve, hogy szteroid szubsztrátumikénit a ll^szuibsztituálatlan-16«,17«-dihidroxi-i3-keto-/J*-pregnén sorozatbeli szteroidok 16,17-eiklöborátészterének alkásMifémsóját használjuk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jeHemiezve, hogy szteroid szubsztrátumként a 16a-hidrox^kortexolonHl6,-17-cikloborát alkálifémsóját használjuk. 1 rajz, 1 képlet A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7207164. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. §
