159228. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11,16a, 17a-trihidroxiszteroidok előállítására

159,228 miusok többek között: CurvularAa (pl. C. liínata), Ooniotíiynuim (pl. C. hellebori), Cbaetomiella (pl. C. ofolötnga), Doithiohiza (pl. D. ferruginosa), Spondylocladiium (pl. S. ausitrale), Cunnáinghiamielia (pl. C. blakesleeänia), Rhodosepto- 5 ria sp., PycnospoTÜum sp., Stachylidium (pl. S. bicolor), Botrytis (pl. B: cinerea), CöHeitatrichum (pl. C. phömoides) vagy Oorticdiuin (pl. C. sasaki). Ha magát a mikrcxfflgiamáiztmust használjuk fel, 10 akkor azt aerób tenyésztjük ismert alkalmas táptalajon, és a 11-hidiroxilozmi kívánt szteroidot a tenyészltés elején vagy valaimifeor annak során adjuk a táptalajhoz. ló Általában a mikroorgapiarnus tenyésztésének körülményei e találmány céljára ugyanazok, mint az anitilbiioltikumok vagy vitaminok termelésére irányuló tenyésztés körülményei. Eszerint a mikroorganizmust allfeaknias táptalajon 20 vagy táptalajban kellő oxigén (levegő) ellátás közben tenyésztjük. Az alkalmas táptalaj lényeges alkotórészei nitrogéntartalmú anyagok és egy asszimilálható szémforráis, továbbá egy energiaforrás. Az utólbbi lőhet szénhidrát, pél- 25 dául szacharóz, melasz, glukóz, malltóz, keményítő vagy dextrin. A niitrqgénfonrás lehet szerves (pl", szójiababliiszjt, kukortoalekvár, húskivonat, szeszmoslék, paptonok és/vagy élesztőkivonat) vagy szintetikus (pl. egyszerű szerves s0 vagy szervetlen vegyületek, mint az amnióniumsók, alkálinijtráitok, aminosavak, karbaimid). Szteroid szubsatrátuimiként a lil-szubsztituálatlan 16«,17«-dihidioxis)Ziteroidok bármely vízben oldható 16,17Heikk)iborátásztere használható (1. pl. 35 a Chemistry and Industry 1961, ápr., p. 467 helyét). Előnyösek a pregnáinsorozaitba tartozó szteroidok, különösen a 3-feeto-zl*-pregnén-sorozart szteroidjai. 40 A vegyületek közié tartoznak a l!

6,17-ciM'oborátészjterek alkálifémi- (pl. nátrium vagy kálium) sói és amimóniumsöi. Különösen előnyösek az I általános képletű szteroidok — ebben a képletben az 1,2- és 6,7-ihelyzatek telítettek 45 vagy kettőskötésüek, X és X' azonosak vagy különbözők, és hidrogén- vagy halOigértatomot, hidroxil-, kevés saénatomas alfcoxi- vagy kevés szénatomos alkilcsopoiritot jelentenek, ezek közül legalább az egyik hidrogén, Y hidrogénato- 50 mot, Móratomot vagy fluonatomot vagy metilcsoporfot jelent, Z hidrogénatomot vagy halogénatomiot vagy hidroxil- vagy acilbxicsoportot jelenít és R" egy kation, előnyösen alkálifém vagy ammónium. 55 Alkalmas szteroid szubszitrátumok például a következő szteroidok lő.lV^oifclabarátésztereinek az alkálifém- vagy ammóniumsói: 16a

,17«-dihidroxiprogeszteiron, 16«,17«,2fl«trihidroxipro- 60 geszteron, 6«-imetil-l!6a

, 17«-dihiidiraxiiprogeszteron, e^którHlfí« 17^difódroxiprogeszteron, 6a-f luoir-16«, l^dihidroxiiprogeszteron, 16«, 17*-dihidroxi-.21 -4 luorprogesztaran, 16«, 17«-dihidroxi-21-k'lórprogeszteron, 16«,17a-dibMroxi~l-deíhid- gs roprogeszferon, li6a

,17«-dihiidrioxi-6-dehidroprogesztíeiron, 6-flUor-6-dehidro-(Í6tt,17*«dinidr!oxiprogeszteron, 16«-ihidiroxi-ikortexoilon, 1-dehJdro-16«-hidroxi-bortexolon, 6-dähidiio-ll6»-hidroxi-koirtexolon, 1 ,6-bisz-deMdro-16a~Mdroxi-kQrtexolon, 6a-<meitil-;i6ia-'hi(iroxiilkor!texo.lan, 6«-klór-lö^Mdtroxifcortexoflion, S^flTaor-löa-hidroxiikortexolon és a 21-ihiidroxilcsioporttot tartaüinazó szteroidok észterei. Különösen előnyösek a 12 szénatomnál kevesebbet tartalmazó szénhidrogén-karbonsavaik észterei; ilyen savak például a 12 szénatomnál kevesebbet tartaülmiazó alkánkarbonsäivak, l!2 szénatomnál kevesebbet tartalmazó aükénkaribonsavalk, egygyűrűs arilkarbonsiavajk, egygyűrűs ariil-!(kevés szénatomos)-alkánkianbonsavak, cikloalfcáinkíarbonsavak és riiklolalkénfcairbolnsafvak. Minthogy a találmányban alkalmazott szteroid szuteztrátumdk, eltérően a szokványos szteroid anyagoktól, víziben jól oldhatók, vizes oldatban vagy szilárd állapotban vagy nem-vűzes oldatban adhatók a 11-hidroxiláló táptalajhoz, és mindig oldott állapotban maradnak a fermentációs közegben. Ez a különbség egyike a találmány szerinti eljárás előnyeinek az eddigiekhez képest, ment lehetővé teszi, hogy a szuibsiztráitum nagyobb koncentrációban legyen jelen oldotit állapotban, mint eddig 'lehetséges volt. Eddig ugyanis a szteroidot többnyire szerves oldószeres oldatban, például dimetilformamidban adták a fermentációs közeghez. Ezek a szerves oldószerek inhíibiitálják az enzimes 1 l-hidroxilozást, és ezért korlátozzák azt a szteroid koncentrációt, amely egy 11-hidroxilozó rendszerben lehetséges. Más esetben a szteroidot szilárd alakban alkalmazták, de ebben az esetben a reakciósebességet és a reakció terjedelmét az oldódás sebessége és a szteroid végső oldhatósága korlátozta. A találmány szerinti szteroid szubsiztrátumok alkalmazásával azonban 0,0125 mólos szteroid szuibsztrátum koncentrációk alkalmazhatók azokban a műveletekben, amelyekben a szubsztrátumot a mikroorganizmus híg tenyészetéhez adjuk, és 0,1 mól szteroid szuihaztrátum alkalmazható azokban a műveletekben, amikor a szubsztrátumot elkülönített koncentrált sejteket vagy 11-hidroxillozó enzimet tartalmazó rendszerhez adjuk. Előnyösen a szubsatrátum koncentrációja az első rendszeriben kb. 0,0002—0,002 mól az utóbbiban pedig 0,0002—0,026 mól. A szteroid szubsztrátuimot vizes vagy vizes-alkoholos oldatban vagy a táptalajba adjuk a mikroorganizmus tenyésztése előtt vagy közben, ha a mikroorganizmust magát használjuk, vagy az elkülönített sejteket, spórákat vagy sejtmentes 11-hidroxiloző enzimjét tartalmazó vizes közeghez adjuk, ha ezt a módszert allkalmiazzuk. A reakció a szteroid és az enzim koncentrációjától függően kb. 1—120 óra alatt megy végbe. Ekkor a ll-hiidroxilozott származé!k 16,17-<cikloborátésztere elkülöníthető. Előnyös azonban, ha a közeget — mikroorganizmus