159067. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a W847-A antibiotikum és származékai előállítására
159067 jelen, a fő alkotórész W847—Ci lévén. Így még ilyen bonyolult elválasztási módszerrel is a W347—A-t csak kis hozammal kapjuk. Ennélfogva kívánatosnak látszott olyan eljárás után kutatni, amelyben a W847—A-t jobb hozamokkal és egyszerűbb módszerekkel sikerül kinyerni. Megállapítottuk, hogy a W847—B, W847—Q és W847—C2 legalább egy hidrolizálható csoportot tartalmaznak, és ezeket eltávolítva W847— A-hoz jutunk. 15 A találmány szerinti eljárással tehát sikerül W847—A-t jó hozammal egyszerű módon előállítani, nevezetesen a W847—B-t, W847-Ci-et 0Q és/vagy W847—C2 -t tartalmazó szubsztrátum szelektív hidrolízisével ezeknek W847—A-vá való átalakítása céljából, és a W847—A-nak vagy egy W847—A-ban dús frakciónak szabad állapotban vagy egy funkcionális származéka „5 alakjában való elkülönítésével. Előnyösen a szelektív hidrolízist nem-savas körülmények között hajtjuk végre, nevezetesen szabályozott hí gos hidrolízisként 9—12 pH-jú közegben. Kívánatos a hidrolízist az átalakulás befej eztéig folytatni. Igen megfelelően alkalmazható a találmány szerinti eljárás a 715 638 számú belga szabadalmi leírás szerint készült fermentiere a frakcióknak, vagy akár a W847 komplexnek a fermentléből való elkülönítése nélkül. Ugyanúgy lehetséges azonban az elkülönített W847 komplexből (általában a fermentlének vízzel nem elegyedő oldószerrel való extrahálása és koncentrálása útján készül) vagy az elkülönített W847—C komplexből, vagy a W847—B, W847—d és W847—C2 antibiotikumok egyikéből, vagy akár a, W847 komplex két vagy több frakcióját tartalmazó keverékből kiindulni. Azonkívül jelen találmány nem korlátozódik a Micromonospora sp. W847 var. NRRL 3274 vagy var NRRL 3275 törzs tenyésztésével készült W847 komplex, W847—B, W847—Ct és W847—C 2 antibiotikumok átalakítására. Egyrészt felhasználhatók a Micromonospora sp. W847 egyéb variánsai és azoknak nagyfrekvenciás besugárzással, például röntgen — vagy ultraibolya sugarakkal, továbbá aktinofágokkal és nitrogénmustárral előállított mutánsai, másrészt más mikroorganizmusok is termelhet- 55 nek egy vagy több W847 antibiotikum frakciót. Azonkívül szintetikusan készült W847 antibiotikum frakciók is hidrolizálhatók W847—A-vá. Másszóval a találmány szerinti eljárás hatásosan alkalmazható W847—^B, W847—Ci és W847—C2 60 antibiotikumok és keverékeik W847—A antibiotikummá való átalakítására, függetlenül attól, hogy hogyan keletkeztek a kiindulási anyagok. A találmány szerinti eljárás kiindulási anya- 65 gai jól azonosíthatók eredetüktől és előállításmódjuktól függetlenül. A W847 komplex antibiotikum antibakteriális 5 spektrumát az 1. táblázatban mutatjuk be; a hatóképesség nem csökken lényegesen, ha az antibiotikum 37 C°-on 24 óra hosszat érintkezik a tripszin, kimotripszin, pepszin, a-amiláz vagy penicillináz enzimmel. 10 A W847—A, W847—B, W847—Ci és W847—C2 komponensek azonosíthatók a 2. táblázatban közölt kémiai és fizikai tulajdonságaik, a 715 638 számú belga szabadalmi leírás 1, 2, 3 és 4. ábráján bemutatott infravörös színképük, a 715 638 számú belga szabadalmi leírás 5, 6, 7 és 8. ábráján látható mágneses magrezonan'ciaspektrumuk és az 1. táblázatban közölt antibakteriális spektrumuk alapján. Az infravörös színképeket ásványolajban (Nujol) vizsgáltuk, és a szignifikáns abszorpciós csúcsok a 3. táblázatban vannak megadva a következő jelzésekkel: e=erős, k=közepes, gy=gyenge, ne=nagyon erős, sz= széles, él=éles, váll=vállas és o=oldalsáv. A mágneses magrezonancia (NMR) spektrumokat Varian A—60—A ' spektrométerrel mértük a frakciók mintájának deuterizált kloroformos oldatában (kb. 0,4 ml, kb. 20 mg/ml). A spektrumokat mg/kg dimenzióban tüntetjük fel tetrametilszilánhoz, mint belső standardhoz képest. Az 1. táblázatban a vizsgált mikroorganizmusok érzékenységét az antibiotikumokkal szemben hígításos próbában határoztuk meg nátriumhidroxiddal 8,0 pH-ra beállított élesztős marhahúslében. 30 35 40 45 50 Az 1. táblázatból kitűnik, hogy a W847—A antibiotikum szélesspektrumú hatást fejt ki mind Gram-pozitív, mind Gram-negativ mikroorganizmusokra. A Gram-pozitív csoportba tartoznak olyan patogén mikroorganizmusok, mint a Streptococcus, Staphylococcus és Diplococcus nemek fajai, számos betegség okozói. A Staphylococcus és Streptococcus fajok közül egyesek okozzák a tehenek emlőgyulladását. Ezek a fajok jól elpusztíthatok W847—A antibiotikum viszonylag rövid ideig tartó alkalmazásával. A W847—A antibiotikum hatásos Gram-negatív mikroorganizmusok ellen is, nevezetesen az Escherichia, Salmonella, ,Proteus és Pseudomonas nemek fajai ellen. Ezek .a szervezetek számos súlyos betegségi tünet, többek között a vizelet-kiválasztó rendszer fertőzései és hasmenés okozói. Ezek a tünetek eléggé gyakoriak embereken és háziállatokon, például szarvasmarhákon, lovakon, birkákon, sertéseken, kutyákon és macskákon, és hatásosan kezelhetők W847—A antibiotikummal. A W847—A antibiotikum ,0,5%-os vizes karboximetilcellulózban szuszpendálva és ultrahangos kezeléssel diszpergálva
