159039. lajstromszámú szabadalom • Eljárás patogén baktériumok növekedését gátló antibiotikumok előállítására
159039 29 30 A termék analízis alapján SF—83,7—A2 és SF— —837—A3 jelzésű anyagot, valamint csekély mennyiségű SF—037 jelzésű anyagot tartalmaz. Az alumíniunioxid-vékonyrétegen egyetlen foltot adó 70—05. frakciókat egyesítjük és vá- 5 . kuumfoan bepároljuk. 0,8 g fehér, porszerű, 1Í2I2—124 C°-on olvadó terméket kapunk, amely elemzés alapján tiszta, szabad SF—©37 jelzésű bázisnak bizonyult. 10 5. példa: A 4. példában leírt eljárás szerint, szilikagélen végzett fcromatografálás után kapott lg, 15 fehér színű, SF—'837—A2 , S.F—8137—A 3 és csekély mennyiségű SF-^837 jelzésű anyagot tartalmazó port 4 ml benzolban oldjuk. Az oldatot 100 ml, benzollal átitatott alumíniumoxidot tartalmazó oszlopon bocsátjuk át, eluálószer- 2 o ként l:il arányú etilacetát :benzol elegyet alkalmazunk. Az eluátuamot 20 ml-es frakciókba gyűjtjük, és az egyes frakciókat aluimíhiumoxid-vékonyrétegkromatografálásnak vet j ük alá (eluálószerként 2:1 arányú etilacetát :benzol 2 g elegyet alkalmazunk). Az alumíniumoxid-vékonyrétegen egyetlen foltot adó 30—48. frakciókat egyesítjük és vákuumban betöményítjük. 230 mg fahér, porszerű, 1Í2I2—il2© C°-on oljvadó terméket kapunk, amely analízis alap- ^ ján tiszta, szabad SF—837—A3 jelzésű bázisnak bizonyult. A 80. frakció leoldása után az eluálást 2:1 arányú etílaeetát : benzol eleggyel folytatjuk, a 90—125 frakciókat egyesítjük és vákuumban 35 bepároljuk. 280 mg fehér port kapunk, amely az elemzés adatai alapján kb. 70 súly% SF— —837—A4 jelzésű anyagot tartalmaz, 250 mg fenti módon kapott port 3 ml benzolban oL-dunk, és az oldatot 50 ml, benzollal átitatott 40 alumíniumoxidot tartalmazó oszlopon bocsájtjuk át, Eluálószerként 1:3 arányú etilaeetót: ;benzol elegyet (300 ml), majd 2Ü arányú etilacetát :benzol elegyet alkalmazunk. Az eluátumot 5 ml-es frakciókban gyűjtjük, és a frak- 45 piókat alumíniumoxid-vÉkonyrétegen megvizsgáljuk. Az alumíniumoxid^vékonyrétegen egyetlen foltot adó 36—47. frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk. 80 mg fehér, porszerű, 125—-l!2ß C°-om olvadó terméket kapunk, amely 50 analízis alapján tiszta, szabad SF—Ä37—A2 jelzésű bázisnak bizonyult. 6. példa: 55 13,0% glükózt, 5% oldható növényi fehérjét, 0^2P/0 káliumkloridot és 0,3% kalciumkarfoonátot tartalmazó, 7,0 pH-értékű, 30 liter folyékony táptalajt SF—837-tÖrzzsel (Streptomyces ínycarotfaciens) oltunk be, és az elegyet 85 órán át 30 C°-on, keverés és levegőztetés közben tenyésztjük üvegfenmentorban. A fermentlevet szűrjük, és a mítiéliumot tartalmazó szűrőlepényt híg sósavoldattal mossuk. A szűrletet és 65 a mosófolyadékot egyesítjük. 2;8 liter folyadékot kapunk (aktivitás: 300 meg/ml). A pH = 8,4 értékű szűrletet 7 liter butilacetáttal extraháljuk, és a kapott butilacetátos oldatot a 4. példában leírt módon dolgozzuk fel. 15,2 g nyers, sárga port kapunk. 1:5 g fenti módon kapott nyers port 200 ml butilacetátiban oldunk, és az oldatot 400 ml, butilacetáttal átitatott szénport tartalmazó oszlopon bocsájtjuk át. Eluálószerként butilacetátot alkalmazunk. Az eluátum aktív frakcióit egyesítjük, és a kapott, 1,8 liter térfogatú oldatot vákuumban kb. 220 ml végtérfogatra betöményítjük. A tömény oldatot 50 ml desztillált vízzel hígítjuk, 6 n sósavoldattal pH = 2 értékre savanyítjuk, majd gondosan összerázzuk. A vizes fázist elválasztjuk és 1 n nátriumihidroxid^oldattal pH = 9,0 értékre lúgoisítjuk. A kivált csapadékot kiszűrjük és exszikkátorban szárítjuk. 6$ g fehér színű, 720 meg/ml aktivitású port kapunk. A kapott port 12 ml benzolban oldjuk, és az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szűrletet 600 ml, benzollal átitatott szilikagélt tartalmazó oszlopon bocsátjuk át, eluálószerként 6:1 arányú benzol:aceton elegyet alkalmazunk. Az eluátumot 20 ml-es frakciókba gyűjtjük össze. Az SF-^837—A2 , SF—837—A 8 és SF—837—A4 jelzésű anyagok az SF—837 jelzésű anyag előtt hagyják el az oszlopot. A frakciók kis mintáit szilikagél-jvékonyrétegen megvizsgáljuk, eluálószerként 2:1 arányú benzol :aceton elegyet alkalmazunk. A 64—4*2. frakciókat egyesítjük és vákuumban betöményítjük. 800 mg fehér port kapunk, a termék az elemzés eredményei alapján csekély mennyiségű SF—837 jelzésű termék mellett SF—4837-HA2) SF—837—A 3 és SF—837— —A4 jelzésű anyagot tartalmaz. A kapott fehér port a 4. példában leírt módon szilikagél-oszlopon, majd az 5. példáiban leírt módon alumíniumoxíd-oszlopon kromatográfiaijuk, 15 mg tiszta, szaibad SF—'837—A2 jelzésű bázist, 85 mg tiszta szabad SF—J83I7—>A3 jelzésű bázist és 35 mg tiszta, szabad SF—837—A4 jelzésű bázist kapunk. 7. példa: . 200 mg, a 2. példa szerint kapott SF—837 jelzésű anyagot 10 ml etiléterben oldunk, és a kapott oldathoz telített citromsaiv-oldatot csepegtetünk. A kivált csapadékot szűrjük és szárítjuk. 230 mg SF—837 jelzésű anyag-citrátsót kapunk, op.: 162-H167 C° (bomlás). 200—200 mg, a 4. és 5. példa szerint kapott SF—837—A2 , SF—837-HA3 , SF—837—A4 jelzésű anyagot a fent leírt módon citromsavval reagáltatunk. ,210 mg, 2!20 mg, ill. ISO mg megfelelő citrátsót kapunk. 8. példa: 300 mg SF—837—A3 jelzésű anyagot 20 ml desztillált víziben szuszpendálunk, és a szuszpenzióhoz vizes borkősav-oldatot adunk. Az 15
