159029. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált pirazol-származékok előállítására
159029 Figyelembevóve, hogy a jelentősnek nevezhető túlélési index minimálisan 1,124, a fenti táblázat világosan mutatja, hogy. a vizsgált vegyületek, hatékonyak voltak a különböző influenza vírusok letalis hígításainak kitett egerek túlélési idejének művelésében. 2. sz. vizsgálat (48 órás egér-teszt). Ezt a kísérletet abból a célból végeztük, hogy megvizsgáljuk a találmány szerinti vegyületek hatását a különböző vdrusokra,, mégpedig a virus növekedési ciklusának a kezdeti stádiumiában. A kísérleteket egereken végeztük. Az egereket 3 csoportba osztottuk: Az első két csoiport a vizsgálandó anyag „ megfelelő adagját kapta, az egyik csoport intraperitoneálisan (IP), a másik pedig orálisan (PO). Egy órával később mindhárom csoportot fertőztük a vírus hígított aeroszoljával. További vizsgálandó anyagmennyiséget adagoltunk még az elsővel azonos koncentrációban és azonos módon a két első csoportnak, a fertőzést követő 3 és 24 óra után, A harmadik, kezeletlen csoport képezte a kontroli-csoportot. 48 órával a fertőzés után felboncoltuk mind a kezelt csoportba tartozó, mind a kezeletlen csoportba tartozó álla-, tokát. Mindegyik csoportba tartozó állat tüdejét kioperáltuk, csoportonként gyűjtöttük és fcazein-nidrolizátUimban eldörzsöltük, ilyen módon három 10%K>S homogén-keveréket kaptunk. A kezelt állatok e hömogén-toeverékeiből két hígítási sorozatot készítettünk, melyek koncentrációja 1/10-e a korábbi hígításnak. Ezeket az oldatokat 11 napos emibrionált tyúktojásofoba fecskendeztük (0,2 ml/tojás) hogy meghatározzuk az egér tüdejében maradt virus fertőző hatását a tojásra. Mindegyik virus-oldattal 6 tojást fertőztünk. 48 órás 37 C°-on végzett keltetés után feltörtük a tojásokat és öszszegyűj törtük az allantoinos folyadékot, Haemagglutániáciés jelenséget észleltünk 0,6 ml friss 0,5%-os csirke eritroóita szuszpenziót adagolva azonos térfogatú allantoinos folyadékhoz (egy-egy tojásból eredőhöz). A titer, melynél a tojás fertőzhetőségének 50%-os végpontját (EIDS0) elérjük, a haemagglutináctós vizsgálat eredményeiből kiszámítható. Ezeket az eredményeket összehasonlítottuk azokkal az adatokkal, amelyeket úgy kaptunk, hogy ugyanezt az eljárást alkalmaztuk, csakhogy a kontroli-Hallatok tüdejét használtuk fel. Egy 10 g-os EIDJ0 csökkenést, a /kontroli-adatokhoz viszonyítva, jelentősnek tekintettünk. Az ebben a kísérletben alkalmazott találmány szerinti vegyület a 3-í(4-ipiridil)^-p-hidroxifenil)-l5-etilpiirazol volt. Az evvel a vegyülettel kapott eredíményieket a különböző, alkalmazott virusokkal szemben, az alábbi táblázat foglalja össze. Vegyület Log csök-Virus^dózis T,. ' . ,' , „ ,. kenés a az LD50 Vírus adag beviteli kontTOHhoz szorzó _ mg/kg mód 35 40 45 képest Influ500 IP . —1,87 Nem. hatáenza :•'':-. , roztukmeg 10 FR8 50 IP —1,69 Nem határoztuk meg 5: IP —1,41 Nein határoztuk meg 500 PO —1,07 Nem hatá-15 , . roztuk meg 50 PO - —1,21 .•JSTem határoztuk meg Jaip 50 IP —1,153 . 20 20 306 im HCl ' -; 500 PO -&& 3,2, 50 PO —2,7 3,2 ' " 5 "•" PO —2,0 3,2 25 Sertés 500" a IP -.1,8 14 A 50 IP --1,0 14. 50 PO —1,4 -- 14 5 PO -4,1 14 30 3. sz. vizsgálat (intranazális). Kísérleteket végeztünk a 3w(4-piridil)-4-(2-hidroxifenilJ-S-etilpirazol (A. vegyület) influenza-virussal szembeni hatékonyságának megr határozására egereikbe való intranazélMs bevitel esetéin. A vizsgálandó vegyületet különböző koncentrációkban és különböző . időpontokban adagoltuk olyan aeroszollal való fertőzés előtt, amely megfelelő , hígításban tartalmazta a virus! A vizsgált vegyület 10%ros szusspenziójával kapott eredményeket a virus LD50 dózisa 2!5-rSZörösével fertőzött, egerekben a szuszpendáláshoz használt hígítóval összehasonlítva az alábbiakban mutatjuk be: 50 Anyag A bevitel időpontja a fertőzés előtt % Túlélés H.N.A' TI. Vírusdózis, az LDso szorzószáma 55 A. vegyület 6h 50 11,80 1,90 25 4h m 11,70 1,88 25 2» 70 12,18(0 2,07 25 30 perc 40 lll,í80 1,90 25 60 Hígító 6h 0 5,07 0,964 25 30 perc 0 5,70 0,920 25 Vírus 65 egyedül 0 6,20 — 25 3
