158938. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3,4-diaza-szteroidok előállítására
3 158938 4 rint egy 3-oxa~A-inorandrosztan-5ß,17;/i-diol-i2--ont egy Y—NH—NH2 általános képletű hidrazinnál reagáltatunk — ebben a képletben Y a fenti jelentésű — és így olyan II általános képletű vegyületekét kapunk, amelyek képletében R hidroxilcsoportot és R' hidrogénatomot jelent. A 17'/?4iidroxi-wegyjületek azután a fenti savak egyikének savikloridrjavial vagy savanhidridjével acilozbatók szerves bázis, például piridin jelenlétében, és így olyan vegyületekhez jutunk, amelyek képletében R aciloxicsoport, vagy oxidálhatok, például krómtrioxiddal, olyan. II általános képletű vegyületekké, amelyek képletében R és R' együtt oxigéncsöport. Ezek a 17-ketavegyülétek egy Grigmardvegyülettel, például kevés szénatomos alkilmagnéziujmjodiddal, kezelve azokat a II képletű vegyületéket szolgáltatják, amelyek képletéiben R' kevés szénatomos alkilcsoport, és R hidroxilcsoport, vagy egy R'-szufosztituált litiumszármazékbal azokat a II képletű vegyületek adják, amelyek képletében R' vinil-, etimil-, halogénvinil-, halogéné tini 1- vagy trifluormetiletinilcsoport és R hidroxilcsoport. Ezek az R'-szubsztituált vegyületek peilklóiisav jelenlétében egy aeilkloriddal vagy savanihidriddel észterifikálva olyan II képletű vegyületekké alakíthatók át, amelyek képletében R' hidrogénatonitól eltérő jelentésű, és R aeiloxicscportöt jelent. A Colletotrichum linicolával való mikrobiológiai hidroxiláliással olyan I képletű végtermékekhez jutunk, amelyek képletében R" hidroxilcsoport és R'" hidrogénatoni (azaz a 6/^hidroxi~vegyületeklhez). Ezek a vegyületek azután egy szerves bázis, például piridin, jelenlétében a fent említett savak egyikének Kloridjával vagy anhidridjével kezelve észterifibájhatóik olyan vegyületekké, amelyek képletében R és R" aciloxicsoport, vagy krómtrioxiddal oxidálhatók olyan I képletű vegyületekké, amelyek képletében R" és R'" oxigéncsoportot alkotnak. Ez az oxidáció kihat a 17-Jhidroxilcsoportra is, ha R' hidrogénatom, azt egy 17-!ketocsopor'ttá oxidálva, és így a 2,i 6,íl7-tiriketovegyületet szolgáltatva. A következő ípéldák szemléltetik a találmány szerinti eljárást. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokokban adjuk meg. 1. példa: 3-N-Metil-3,4-diaza-6|/?,17i/^hidroxi-androszt-4-én-2-on A) Fermentáció Colletotrichum linicolának (NCTC 1194, National Collection Type Culture, London) tápanyagként 1 liter desztillált víziben 10 g glukózt, 2,5 g élesztőkivonatot, 1 g kálium!hidro:génfoszfátot és 20 g agait tartalmazó két ferde agaros (A táptalaj) két hetes tenyészete felületéről vett telepet 5—5 ml 0,01%-os ' vizes nátriumlaurilszulfát-oldatban szuszpendálunk. Az egyesített szuszpenzióból 1—il ml-re beoltunk nyolc 250 ml-es Erlenmeyer-lomlbikban 50—50 ml következő összetételű sterilizált táptalajt (B): 5 gramm kukoricalékvár 6 ammóniumdihidrogéraföszf át 3 élesztőkivonat 2,5 10 glukóz 10 káldumfkarbQnát 2,5 desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. 2i5°-on- állandó forgató rázás közben (280 íor-15 dulat perceinként, 5 cm löket) való 72 órai inkuibálás után 10—H0 tf%-ot a fermentléfoől átviszünk hairminanégy 250 ml-es, 50—50 ml friss sterilizált B közeget tartalmazó Erlenmeyer-lombikibia. 20 Ezután hozzáadunk 300 /Ag/íml szteroidot oly módon, hogy minden lombikihoz hozzáadunk 25 ml-t 3-N-imetil-i3,4-di!aza-17;/?4iidroxiand.roszt-4--én-2-onnak N,N^dimetiJformamiddal készült '60 mg/ml koncentrációjú steril oldatából. Összesen 25 510 mg-ot fermentálunk. Mintegy 30 órai további inkubálás után a fentiekkel azonos körülmények között a palackok tartalmát egyesitjük, és a fermentlét Seitzféle derítólszűrőn átszűrjük. A' palackokat, mi-30 eéliumot és SeitzHSZűrőt többször átmossuk 100'— 1Ö0 ml meleg vízzel. Az egyesített szűredék és mosófolyadékok térfogata 1900 ml. 35 B) Elkülönítés Az így kapott szűredébet 3 ízben kloroform- i mai extraháljuk. A kloroformos kivonatokat' 3 ízben vízzel mossuk, nátriumszulfát fölött meg-4Q szárítjuk, és szárazra bepároljuk. A maradékot metanol és izopropiléter elegyéből kikristályosítva 312 mg 3JN-metil-3,4-diaza-6i /? : :17/?-diJhidroxi-amdroszt-4-én-2-ont kapunk 263,5—2Í95,Í5° olvadásponttal. Az analitikai mintát metanol és 45 izopropiléter elegyéből való átkristályosítással készítettük. Olvadáspontja 2.67,5—268,5°; [.a]D 24 = ==+1°. (etanolban); %KBr 2,86, 3,01, 6,10 és X3MS 6,23 fi; (etanolban), 252 m,u (7550); T CDC1 9,17 (e, 18—Me), 8,80 (e, 19—Me), 6,62 íe, 3—N—Me), 50 6,32 (ik, 17cr—H) és 5,52 (k, 6—a—H), (e=erős, k =.közepes). Összetétel: C18 H 28 0 3 N 2 (320,42.): számított: C 67,47, H 8,i81, N 8,74% 55 talált: C 67,28, H 8,60, N 8,68% 2. példa: 3-N-MetiP3,4-diiaza-:6v?,il7i/?-diiacetoxi-andro:szt-4-en^2-on 50 mg 3-N^metil-3,4-diaza-6./?,17;/?-dihidroxi-androszt-4-en-j2-onn:ak 0,í25 ml ecetsavanihidrid-65 del és 0,50 ml piridinnel készült oldatát víz-
