158303. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 0-(béta-D-arabinofuranozil)-6-amidino-purin származékok előállítására

158303 4 annak számos tagját az Angewandte Ohemie 72, 838 (1960) közleménye ismerteti. Más e csoportbeli vegyületek, amelyeikről az irodalom eddig nem számolt be, az aláfoíb részletesebben ismertetett eljárással, vagy pedig a fentidézett közleményben leírt módszerek valamelyikével állíthatók elő. A találmány szerinti eljárás termékei új vegyületek, amelyek értékes farmakológiai tulajdonságokat, különösen vírus-ellenes aktivitást mutatnak. így ezek a vegyületek különösen a herpes és a vaccinia vírusok ellen mutatkoztak hatásosaiknak. A találmány szerinti új vegyületek vírus-ellenes aktivitása mennyiségilleg a Dulbeeco (Proc. Nat. Acad. Sei. 38, 747—752, 1952) által először kidolgozott, majd Hsiung és Melnick (Virology, 1, 533—535, 1955) áltál módosított in vitro módszerrel határozható meg. E módszer szerint először egy egysejit-r átéget fejlesztenek ki egy üveglemezen, majd a tápközeget eltávolítják és a vírust egy meghatározott idő- . tartamon keresztül adszorbeáltatják az egysejtrétegre. Vírusellenes hatóanyag távollétében a vírus a sejtréteg jól meghatározott terület-részeit elpusztítja, ezeket a foltoknak nevezett területrészeket makroszkopikusan is meg lehet figyelni, a sejtréteg semleges vörös színezékkel vialó megfestése esetén. Egy adott vegyület gátló hatásának vizsgálata céljából a vizsgálandó vegyület oldatát hozzáadjuk a vírust és a sejtréteget tartalmazó rendszerhez és az egészet egy semleges vörös színezéket tartalmazó ágár-tápitalajnéteggel rétegezzük feliül. Inkubáltatás után a foltokat megszámláljuk és a vizsgálandó vegyületet tartalmazó rendszerben keletkezett foltok számát összehasonlítjuk a vizsgálandó vegyület hozzáadása nőikül, de egyébként azonos körülmények között lefolytatott ellenőrző kísérletben kapott foltok számával. A vizsgált vegyület gátló aktivitását a hatóanyagot tartalmazó közeggel végzett kísérletben talált százalékos foltszám-csökíkenés mértékével fejezzük ki. Ezzel a foltszám-csökkenési módszerrel, 150 ml-es (4 oz.) üvegpalackokat alkalmazva kísérleti egységekként és H. Ep.^ia sejtókat alkalmazva az egysejiWéteg kialakítására, az új vegyületeik egyák előnyös képviselője, az N'-(9-/3--D^arabinofuranozil-aH-fpurin-e-iiy-IN N-dimetiíformaimidin Haiiksnféle pufferezett (pH = 7—8) sóoldattal készített 31,2 mcg/ml koncentrációjú oldatban 95%-os fojtszámcsöfckenést mutatott a herpes simplex vírus és 78% csökkentést a vaccinia vírus ellen. Amint ez az (I) általános képletből látható, a találmány szerinti új vegyületek szerkezetileg hasonlóak a 9-.(^-D-airabi(nafuranozil)-adeninihez, amelyről isiroeretes, hogy vírusellenes hatása van, főként a herpes és vaccinia vírusok ellen. A szerkezeti hasonlóság ellenére azonban a találmány szerinti vegyületek egy igen lényeges gyakorlati előnyt mutatnak az ismert 9^(/?-D-a'raíbinöfuranozil)^deninnel szemben: vizes közegeikben való oldhatóságuk sokszorosan nagyobb. Így pl. míg a 9-(jö-D-arabinofuranozlil)-adenín víziben való oldódása kisebb, mint 1 mg/ml, addig az N'-(9-!/S-DHaraibinofuranozil^9H-purin-6-il)-N,!N^diinietilfoTm amidin vízben való oldhatósága azonos körülmények között, nagyobb, mint 40 mg/ml. A találmány szerinti új vegyületeik e sokszorosan nagyobb oldhatósága igen fontos előny e vegyületek gyógyszerként való elkészítése és alkalmazása szempontjából. Emellett azt is tapasztaltuk, hogy a találmány szerinti új vegyületek mérsékelten savas vagy mérsékelten bázisos közegben hidrolízist szenvedinelk és 9--(/3-D-arabinofurano.zil)-adenint adnák egyik hidrolízistermékként. így tehát ezek a vegyületeik vízben való jó oldhatóságuk következtében vizes oldatban alkalmazhatók arra a célra, hogy időben elnyújtott módon 9-(/?-D-arabinofuranozity-adenint szolgáltassanak, a hidrolíziskörülmények megfelelő szabályozása útján. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1. példa: 1,5 g 9-(j(?-D-arabinofuranozil)-adenint 30 ml vízmentes N,N-dimetiMormamidban szuszpendálunk, a szuszpenzióhoz keverés közben 15 ml N,N-dimetilformamid-dimetilaeetált adunk és az elegyet szobahőmérsékleten klb. 16 óra hosszat továbbikeverjük, majd a kapott oldatot hozzácsepegtetjük 1000 ml éterhez. A képződött kristályos csapadékot 1,75 g, 97%, amely N'-(9--y?-D-ariabinofuranozil-9H-purin-6-il)-iN,Njdimetilformamidin, szűréssel elkülönítjük, éterrel alaposan mossuk, majd diklórmetán, metanol és éter elegyéből történő átknistályosítással tisztítjuk. A kapott termék 200 C° felett kezdőd fokozatos sötétedés után 214—215 C°-on bomlás közben olvad. Ez a termék 25 C° hőmérsékleten desztillált vízben, valamint 0,1 mólos foszfát-pufferoldatban (pH = 6,6) legalább 40 mg/ml mennyiségi arányban oldódik. Ha a fent leírt eljárást az N,N-dimetilformamid-dimetilacetál helyett IS iml N,N-dietilformamid-dimetiliaeetál kiindülóanyagiként való alkalmazásával folytatjuk le, akkor termékként N'-(9^-D-arábinofurianozil-9H-purin-6-ál)-N,N-dieti!lformamidint kapunk. 2. példa: 3,5 g 9-(/J-D-arabinöfuranozil)-adeninit 30 ml száraz N,N-ddmetilaoetamidban szuszpendáluník, e szuszpenzióihoz keverés közben hozzáadunk 30 ml N,íN-diimetilacetamid-dimetilaaetált, az elegyet 2 óra hosszat tovább keverjük, majd a kapott oldatot sötét helyen 16 óra hosszat szobahőmérsékleten álni hagyjuk. Az oldatot 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1