158238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkalikus proteáz előállítására
7 6000 ml össztérfogat: kukoricaliszt 120 g szójaliszt 60 g CaC1.2 sicc. 6 g KH2PO4 15 g szilikon MSA 6 g A tenyészlev-et a tenyésztés teljes időtartama alatt 1 : 1 v-elumen tevegő/táptalaijtér-fögat mértékben levegőztettük és szellőztettük. A tenyészlé hőmérsékletét a tenyésztés soiián konstans értéken, 33 C°~on tartottuk. A pH a tenyésztés teljes időtartama alatt 6,3—6,8 érték között változott, 65 órás tenyésztéssel a tenyészlé e-xtraeelluláris proteolitikus enzi-malktivitása 20,0 mAE/ml volt. Ekkor a tenyészlé levegőztetését megszüntettük, a t-enyészlét +16 C° értékre hűtöttük lie, majd 21,4 g Na2HPO/,-t és 33,3 g CaC-fHt adagoltunk a sejtes folyadékba, erőteljes kevertetés mellett. 1 órás kev-ert-etés után a tenyészlevet 16 C°-on, pH 9,0-n sejtmentesre szűrtük. Az éles szűrtlé térfogata: 5500 ml proteo1 itikus -enzimaktivitása: 21,8 mAE/ml. Az oldathoz 18,7 g kazeint adtunk. A tenyészlevet ekkor +4 C°-ra hűtöttük le, és 33-00 g ammóniumsziulfátót, az oldat állandó, erőteljes keverte-tése mellett az oldatba ada-goltun'k. Az oldat p;H-ja spontán változott. 18 órán át +4 C°-on való állás után a képződött csapadékot vákuumnuccson kiszűrjük az aktuális légnyomáson és hőmérsékleten. A kapott csapadék nedves súlya 50 g volt. A nedves enzim-fehérjét 40 -C°-on levegőátfúvatással megszárítottuk. A száraztenmék súlya: 36 g, 30 AE/g aktivitással. A kitermelés 90% volt az eredeti tenyészlé aktivitására vona t koztatva. A kapott enzimfehérje proteolitikus tulajdonságait ihemoglóbinra gyakorolt oldó hatásán keresztül vizsgáltuk. Az enzi-mfehérje proteolitikus aktivitásának optimuma pH 9,0 értéken -és 50 C°-on volt. Az aktivitás pH-tól való függésiének szélső értékei: 5,0—11,0. pH 7,0 értéken 30 percen át 50 C°-on tartva -enzimaíkltivitás veszteség nem volt tapasztalható. pH 8,2-<n 60 C°-on 20 percen át tartva az enzknaktávit-ás -8-5%-^a megmaradt. pH 10,0 értéken 50 C°-on, 30 percen át tartva a proteolitikus enzimaktivitás 20% veszteséget szenvedett. A kapott enzimifehérje proteolitikus aktivitása nátriumperlborátiban, valamint mosószerkomponensek jelenlétében az 1. és 2. Táblázatokban foemutaitött értékek szerint változott. 5. példa: A Bacillus subti'lis varietas proteolyticus törzis sejtjeit az alábbi összetételű táptalajban tenyésztettük: 8 6000 ml össztérfogat: kukoricaliszt 120 g szójaliszt 60 g CaCl2 sicc. 6 g KH2PO4 . 15 g szacharóz 30 g napraforgóolaj 6 g 10 A tenyészlevet a tenyésztés teljes időtartama alatt 1 : 1 voluimen levegő/táptalajtérfogat mértékben levegőztettük és szellőztettük. A tenyésznie hőmérsékletét a tenyésztés során konstans értéken, 33 C°-on tartottuk.' A pH a te-15 nyésztés teljes időtartama alatt 6,5—7,0 érték között változott. 65 órás tenyésztés után a tenyészlé -ext-raceiluláris proteolitikus enzimaktivitása 35 mAE/ml vollt. Ekkor a tenyészlé levegőztetését megszüntettük, a tenyészlevet +16 20 C° ért-ékre hűtöttük le, majd 21,4 g ;Na2 HPCM és 33,3 g CaC+t adagoltunk a sejtes folyadékba, erőteljes k-evert-étés -mellett. 1 órás kevertetés után a tenyészllevet 16 C°on, pH 7,0-n sejt-mentesre szűrtük. Az éles szűrtlé térfogata; 25 5600 ml, proteolitikus enzimaktivitása: 37,5 mAE/ml volt. Az oldathoz 2-2,8 g zselatint adtunk. A tenyészlevet +4 -C°-ra hűtöttük le és 3360 g ammómümszulfátot, az oldat állandó, erőteljes kevertetése (mellett az oldatba adagol-30 tunk. Az oldat pH^ja spontán változott. 18 órán -át +4 C°-on való állás után a képződött csapadékot vákuumnuccson kiszűrtük az aktuális légnyomáson és hőmérsékleten. A kapott csapadék nedves súlya 60 g volt. A nedves 35 enzim-fehérjét 40 C°-on levegőátfúvatással -megszárítottuk. A szárazt-erm-ék súlya: 42,0 g, 4,87 AE/g aktivitással. A kitermelés 95,-5% volt, az eredeti t-enyész-40 lé aktivitására vonatkoztatva. A kapott enzimfehérje proteolitikus tulajdonságait hemoglo'binra gyakorolt oldó hatásán keresztül vizsgáltuk. Az enzim-fehérje proteoli-45 .tíkus aktivitásának optimuma pH 9,0 értéken és 50 C°-on volt. Az aktivitás pH-tól való függés-ének szélső értékei 5,0—11,0 értékig terjedtek. pH 7,0 30 percen át tartva 50 C°-on enzim akti vitás veszteség nem volt tapasztalható. 50 pH 10,0 értéken 50 C°-on 30 percen át tartva, a ppoteo-liti'-kus enz-imaktivitás 10% veszteséget szenvedett, 60 C°-on .20 perc alatt 10% aktivitás-veszteség volt tapasztalható. 55 A kapo-tt erizimfehérje proteolitikus aktivitása nátraumperlborá'tlban, valamint mosószerkomponenseik jelenflétéhen az 1. és 2. Táblázatokban bemutatott értékek szerint változott. 6. példa: A Bacillus subtiilis varietas proteolyticus törzs sejtjeit az alábbi összetételű táptalajban te-65 nyásztettük: 4
