158238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkalikus proteáz előállítására

MAGYAR NÉPKÖZT ARS AS AG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGALATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1969. VII. 18. (BI—340) Közzététel napja: 1970..-VII. 24. Megjelent: 1971. VI. 15. 158238 Nemzetközi osztályozás: C 12 d 13/10 Feltalálók: Dr. Nyiri László biokémikus, 20%, Dr. Pólya Kálmán biológus, 20%, Marossy Katalin oki. vegyész, 15%, Végh Józsefné oki. agrármérnök, 15%, Zákány Antal vegyésztechnikus, 10%, Kovács Lászlóné vegyésztechnikus, 5%, Márton Lászlóné vegyésztechnikus, 5%, Nagy Károlyné vegyipari szakmunkás, 5%, Dr. Steiner Gyuláné vegyészlaboráns, 5%, Debrecen Tulajdonos: BIOGAL Gyógyszergyár, Debrecen Eljárás alkalikus proteáz előállítására Mint ismeretes, a proteolitikus 'enzimek előállítása több forrásból oldható meg. Fehérjeoldó tulajdonságú enzimek nyerhetők állati szervekből és növényiekből egyaránt (HEED, G, Enzymes in food Processing. Academic Press. 'New York 1966.) Az ezen alapanyagokból történő nagyléptékű proteáz előállítást azonban .megnehezíti az alapanyag elérhetősége, valamint heterogén jellege. Emiatt legcélszerűbben mikroorganizmus sejtéket használnak, 'melyeikből proteolitikus enzimfehérjék is nyerhetők. A tapasztalatok szerint az egyes enzimfehér -jék felhasználási területét korlátozza, hogy a mikroorganizmusok által termelt proteázok tulajdonságaikban eltérnek egymástól. így például az Aspergillus oryzae törzsek .alámerített kultúrájából nyerhető, különben nagy hatású alkalikus proteáz viszonylag alacsony hőtűrő képessége nem teszi lehetővé az enziimfelhérje mosószerekben való .alkalmazhatóságát. Kutatásaink során olyan enzimífehérjék előállítására .törekedtünk, melyek fajlagosságuk mellett széles spektrumú tulajdonságaik következtében többféle területen való felhasznáhatóságukat teszik leheltővé. így például célunk olyan proteolitikus tulajdonságokkal rendelkező enzimfehérje (komplex) előállítása volt, mely széles pH- és hőintervallumban stabilis, valamint fehérj eoldó hatását hasonlóan széles pH és hőtartományban képes nagy aktivitással kifejteni. Az enzimfehérje mindezen tulajdonságai lé-5 hetővé teszik, hogy detengens tartalmú mosószerekben komponensként alkalmazva annak .mosóhatása előnyösen növekedjék. Számos Bacillus subtilis variánst írtak ezideig le, melyeik e fent közölt pH- és hőtartományban sitabilis-10 nak mutatkoztak [OTTESiEN, M., SOHELLMAN, • C. G., Compt. rend. trav. lab. Cairlsberg, Sér. chim, 30, 157 (1957); MATSUBARA, H. NISHIMURA, S, J. Biotíhem. (Tokyo), 45, 413 (1958); RAPPAPORT, H. P., RIGGSBY, W. S., HOL-15 DEN, D. A., J. Biol. Gnem., 240, 78 (1965)]. Ezen enzimfehérjék azonban egyes mosószerkomponensek, különösen nátriumperborát jelenlétében aktivitásukat nem őrizték meg. 20 Kutatásaink során arra a felismerésre jutottunk, hogy a gondosan szelektált mikrobiológiai faj, vagy variáns enzimképző tulajdonságai a tenyésztési feltételek beállításával, valamint a képződött enzimfehérje stabilitása a ifehérje-25 -izolálási módszerek fajlagos megválasztásaival javítható. Ezenkívül meglepő felismerésként azt találtuk, hogy az alkalikus proteáztermelés mértéke szabályozható glükóznak, vagy szacharóznak, mint katabolitikus represszornak ada-30 golásával. 158238