158224. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikrobiológiai úton előállított enzimek izolálására
7 158224 8 juk. A csapadékot 8 percig centrifugálva (3000 g) elkülönítjük, majd a tannint az oldhatatlan tannm-enzim-komplexből néhányszor aoetonnal keverve extraháljuk. Az enzimet vákuumban szárítjuk. 5,63 g proteazkonoentrátumot kapunk, s melynek aktivitása 0,205 CE/mg. A hozam ennék megfelelően 1320 CE/liter szűrlet, illetve 66%. 4. példa: 10 Aspergillus niger amiláz4öépző törzsének tenyészetéből (21 AE/ml) 1 liter szűrletet 20 ml kukoricalékvárral elegyítünk és a pH-értéket 5,5-re beállítjuk. Az amilázt 30 ml, 4 g tannint 15 tartalmazó oldattal kicsapjuk, 2 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk és a csapadékot 10 percig centrifugálva' (6000 g) izoláljuk. Az oldhatatlan amiláz-tannin-komplexből a tannint acetonnal 5-ször átkeverve eltávolítjuk. A tan- 20 nintól mentes csapadékot vákuumban szárítjuk. 1,34 g amilázikoncentrátuimot kapunk, melynek fajlagos aktivitása 11,2 AE/mg, ami 15.000 AE/liter szűrlet hozamnak felel meg. A kitermelés 71,5%. 25 5. példa: Aspergillus niger lipázképző törzsének tenyészetéből (76,5 LE/ml) 1 liter szűri/etet nátriumhidroxiddal 5,0 pH-értékre beállítunk, 60 ml vízben oldott 3,0 g zselatinnal elegyítjük, majd a lipáz kicsapása céljából 4,0 g tannint tartalmazó tannin oldatot enyhe keverés közben hozzáadunk. A kivált csapadékot 2 óra állás után szobahőmérsékleten erősen centrifugáljuk, majd a tannin eltávolítása céljából a csapadékot egyszer 100 ml, majd 4X25 ml acetonnal 10—10 percig keverjük és közben centrifugáljuk. A tanninból ily módon megtisztított és acetohban nem oldódó enzimet vákuumexszikkáto'ilban szárítjuk. 7,62 g lipázpreparátumoit kapunk, melynek aktivitása 7,33 LE/mg, ami 55.800 LE/liter szűrletnék felel meg. A kitermelés 73%,. A következő táblázatok a találmány szerinti eljárás sokoldalú használhatóságát é;s a hagyományos, fehérje hozzáadása nélküli tanninos kicsapással szemben mutatkozó előnyeit szemléltetik. 4. táblázat Proteáz izolálása Aspergi'llus-tenyészetékből A kísérlet száma Beadagolt fehérje 57/1. 2,5% Kukoriealeikvár 57/11. 0,1%. Kazeinpep-ton 57/111. 0,1%, Zselatin 57/IV. 0,1% Húspepton 57/V. 0,1%, Tejpor (teljes) 57/VI. 5,0%: Soványtej 57/VII. 5,0% Teljestej 57/VIII. 5,0%, Savó Hozam CE/1 1 CE/mg szűrlet % 0,302 1650 71,6 0,924 1385 60,3 0,672 1765 76,7 0,950 1300 56,5 0,782 1355 58,9 0,462 1585 68,8 0,478 1550 67,3, 0,722 1540 66,9 Míg az Aspergilus-tenyésztő-oldatokból a fehérjének a találmány szerinti 'beadagolása nélkül említésre méltó kiválás nem volt, a találmány szerinti eljárással állati és növényi old-45 ható proteinek bevitelével nagy proteolitikus aktivitású enzimet izolálhattunk. 5. táblázat Proteáz izolálása Aspergillus-tanyészetből A tisztaság fokának szabályozása A kísérlet száma Beadagolt fehérje Faji. aktivitás CE/mg Hozam CE/1 szűrlet % 58/1. 0,5'% kukoricálefcvár 58/11. 1>0% kükoricalekvár 58/111. 2,0% kukoricalekvár 58/IV. 2,5% kukoricalekvár 0,594 702 35,1 0,510 1104 55,2 0,380 1310 65,5 0,254 1125 56,3 Az enzimkonoentrátum fajlagos aktivitását a bevitt fehérje mennyiségével sikerült szabá-65 lyozni. Ügyelni kell arra azonban, hogy 1%-nál kevesebb kukoricalekvár bevitele nagyobb hatóanyagveszteséget eredményez. 4
