158174. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 19 042 RP enziminhibitor és összetevői előállítására

25 158174 26 eluátumot kb. 10 ml-es frakciókban fogjuk fel, és optikai sűrűségüket folyamatosan mérjük 253,7 nménél „Uvicard L.K.B." íanalizátara-al. A kapott görbe két jól megkülönböztethető csúcsot mutat. Összegyűjtjük a !két csúcsnak megfelelő frakciókat, az alkoholt csökkentett nyomás alatt elűzzük, és a termékét liofüiz áljuk. A 63—74. frakciókból 290 mg 6550 E/mg titerű 21 052 RP^t kapunk szulfát [alakjában. A 85—104. frakciók 620 mg 6400 E/mg titerű 21 053 RP-tt adnak hidroklorid alakjában. Az 1. csúcsot megelőző és a 2. csúcsot követő frakciók csak igen kevés aktív terméket tartalmaznak. 7. példa: A 2. példában leírt körülmények között kapott és 300 E/mg titerű 182 g nyersterméket a 3. és 4. példában leírt körülmények között kezelünk, a közbülső liafilizálást csökkentett nyomás alatt 30 C°-on való bepárlással helyettesítve. A „Biogel P 4"-en való kromatografálás után kapott 550 ml aktív frakciót csökkentett nyomás alatt 30 C°-on koncentrálva 50 ml 475 000 E/iml titerű oldatot kapunk. Ezt az oldatot előzőleg az 5. példában leírt módon 4 pH-jú .sósavval kezelt aktív alumíniumoxid oszlopon kroniatografáljuk. 2,7 g 6250 E/mg titerű 19 042 RP antibiotikumot kapunk. Az így kapott termék több összetevőt tartalmaz hidroklodijaik alakjában. Elemi összetétele: C 50,5, H 6,8, O 16,15, N 20,0 és Cl 6,55%. A tenméket a következő fizikai tulajdonságok jellemzik: Külső megjelenés: halványsárga amorf por. Ultraibolya színkép (meghatározva 0,05%-os vizes oldatból): elnyelés 200 nm-inél elnyelési minimum 243 nm-nél elnyelési 'maximum 257 nm-nél E { Jm •^ 1 cm & 1 cm 585 7 7,7 8. példa: A 7. példában leírt körülmények között készült és 5120 E/mg .titerű 12,3 g terméket feloldunk 75 ml 18%-os vizes etanolban. Az oldatot „Sephadex LH 20" dextrángél oszlopon kronsatografáljuk. Az oszlop átmérője 10 cm, és 1,6 kg 18%-os vizes, etanollal duzzasztott dextrángélt (tartalmaz. Az oldatot óránként 160 ml ütemben bocsátjuk át az oszlopon, majd 10 15 ugyanazzal a vizesHalkothollál azonos ütemben eluálunk. Az eluátumot fab. 45 ml-es frakciókban fogjuk fel, és optikai sűrűségét 253,7 nmnél „Uvicord L. K. B." analizátorral folytonosan mérjük. A görbe első csúcsa (43—50. frakciók) a 21 052 RP-nek, a második fő csúcsa (55—74. frakciók) a 21053 RP-nek felel meg. A legaktívabb (61—69.) frakciókat egyesítjük, az alkoholt csökkentett nyomás alatt elűzzük, és a terméket Mofilizáljuk. 6 g 6600 E/mg titerű 21 053 RP-t kapunk hidroklorid alakjában. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a 19 042 RP enziminhibitor és 21 052 és 21 053 RP összetevői előállítására azzal jellemezve., hogy Streptomyoes hygrosoopicus 20 DS 10 408 (NRRL 3286) törzset asszimilálható szénforrást és nitrogónforrást tartalmazó levegőztetett táptalajon enyészünk, a képződött 19 042 RP enzkninhibitort elkülönítjük, majd széltválasztjuk a 21 052 RP és 21 053 RP össze-25 tevőikre. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a Streptomyces hygroscopicus DS 10 408 (NRRL 3286) mikroorganizmus törzset szénhidrátokat, szer-30 ves savakat, nitrogéntartalmú anyagokat, mint a nitrátok, szervetlen vagy szerves ammóniumsók, karbamid, aminosavak vagy a nitrogént fehérje alakjában tartalmazó anyagok, és szervetlen sókat tartalmazó . levegőztetett táptala-35 jon 23 és 40 C° között, 6,0—7,8 pH-nál 20—40 óra hosszat tenyésztjük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítás! módja azzal jellemezve, hogy a 19 042 RP enziminhibitort a fermentléből 2 és 8 közötti 40 pH-nál való szűréssel, majd vagy a szűredéknek a koncentrálásával, semleges szervetlen sók hozzáadásával és a 19043 RP-nek vízzel nem elegyedő oldószerrel végzett extrahálásával, vagy a 19 042 RP-nek egy.3 és 7 pH kö-45 zött beállított karbonsav típusú ioncsarélő gyantán valló adszorbeáltatásával és a 19 042 RP enziminhibitornak metanolos hidrogénkloridoldatfcai való eluálásával különítjük el. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganato-50 sítási módja azzal jellemezve, hogy a 19 042 RP enziminhibitort vizes vagy vizes-alkoholos oldatban dextaán- vagy poliakrilamid-gélen vagy alumíniumoxidon végzett kromatografálással választjuk szét a 21 052 RP és 21 053 RP 55 összetevőire. 3 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7107234. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 13