158137. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-karboxi-anhidridek és azok származékainak előállítására

158137 31 terméket szilikagélen vékonyréteg-kromatografálásnak vetjük alá. A termék az alábbi oldószerrendszerekben: izopropanol-víz-ecetsav 7:2:1 arányú elegye; piridin-etilacetát-ecetsav-víz 5:5:1 : 3 arányú elegye; n-butanol-ecetsav-víz 10 : 1 : 3 arányú elegye, aszparagin és izoaszparagin hiteles mintáival összehasonlítva lényegileg tiszta izoaszparaginnak bizonyult. így megállapítottuk, hogy a kiindulási vegyület lényegileg N-karboxi-aszpartinsavanhidrid. IC 32 akkor is, ha ekvivalens mennyiségű 4-klórbenzoxikarbonil-glutamin ekvivalens mennyiségét használjuk a. benzoxikarbonil-glutamin helyett, 30 C°-on négy órán át végzett keverés mellett. 5 Az elkülönítés a fentebb leírthoz hasonló módon történik. 27. példa Glutaminil-alanin előállítása 25. példa N-karboxi-aszparagin-anhidrid előállítása Összesen 2,0 g benzoxikarbonil-aszparagint felveszünk 20 ml dioxánban, és 0,24 ml foszfortribromidot adunk hozzá kb. 25 C°-on, keverés közben. Az elegyet 18 órán át keverjük, majd átengedjük 50 ml térfogatú szilikagél-kolonnán. amelyet metilénklorid és dioxán 1 : 1 arányú elegyével, majd dioxánnal készítettünk. Miután a reakcióelegyet a kolonnára felvittük, egymást követően 8X50 ml metilénkloriddal, 4X50 ml 1 : 1 aceton-metilénklorid eleggyel és 4X50 ml acetonnal hívjuk elő. A kívánt terméket úgy kapjuk, hogy az oldószert a két utolsó 50 ml-es részletből csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A terméket úgy kristályosítjuk, hogy acetonban felvesszük, enyhén felmelegítjük, és nitrogénáramban addig töményítjük, amíg az oldat felhőssé nem válik. Ezután a terméket hexán lassú hozzáadásával hűtés és keverés közben kicsapjuk. Az eljárást megismételjük metoxikarbonil-aszparaginnal és 4-metilbenzoxikarbonil-aszparaginnal; így ugyanazt a terméket kapjuk. 26. példa N-karboxi-glutaminanhidrid előállítása összesen 2 g benzoxikarbonil-glutamint felveszünk 20 ml dioxánban 25 C°-on, és 0,24 ml foszfortribromidot adunk hozzá. A reakcióelegyet négy órán át keverjük, és a terméket kromatográfiás úton különítjük el 200 ml térfogatú szilikagél-oszlopon, amelyet petroléterrel készítünk, és az alábbi oldószerekkel eluálunk: 200 ml metilénklorid 4X100 ml 1 : 1 aceton-metilénklorid 4X100 ml 3 : 2 aceton-metilénklorid 4X100 ml aceton. A terméket úgy különítjük el, hogy az oldószert az utolsó hét részletből csökkentett nyomáson eltávolítjuk. Ugyanezt a terméket kapjuk, ha a benzoxikarbonil-glutamint ekvivalens mennyiségű etoxikarbonil-glutaminnal helyettesítjük, és 15 C°-on 24 órán át keverést végezünk, valamint Összesen 1,0 g N-karboxi-glutamin-anhidridet felveszünk 25 ml 10-es pH-jú nátriumborát-15 pufferben, majd kb. 0 C°-ra hűtjük az elegyet. Ezután gyors keverés közben 0,5 g alanint adunk az elegyhez. Két percig tartó keverés után a pH-t tömény kénsavval 3,5-re állítjuk be, és nitrogént buborékoltatunk át az elegyen, hogy elősegítsük 20 a széndioxid eltávozását. Ezután a pH-t vizes nátriumhidroxid-oldattal 5,7-re növeljük, és a terméket kromatográfiás úton elkülönítjük, hidrogén-ciklusban levő Dowex 50—X2 típusú ioncserélő gyantát használva. (Dow Chemical Com-25 pany Mindland, Michigan, USA). A terméket ammóniumhidroxiddal eluáljuk. A kromatográfiás eljárásban a reakcióelegyet a gyanta 800 ml térfogatú oszlopán vezetjük át. 30 Az oszlopot 60 ml perc sebességgel eluáljuk 11-es pH-jú ammóniumhidroxid-oldattal, és 500 ml-es tételekben gyűjtjük össze az eluátumot. A kívánt terméket a 17. és 18. részlet egyesítése és fagyasztva szárítása útján nyerjük. 35 Az eljárást megismételjük glutaminil-leucin előállítása céljából olyan módon, hogy az alanint ekvivalens mennyiségű leucinnal helyettesítjük. A kívánt terméket ebben az esetben úgy nyer-40 jük ki, hogy a 15. és 16. részletet egyesítjük és fagyasztva szárítjuk. Az aszparaginil-fenilalanin terméket hasonló módon állítjuk elő, ekvivalens mennyiségű N-karboxi-aszparagint és fenilalanint használva. 45 • 28. példa Glicil-glutaminil-glicil-fenilalanil-leucin elő-50 állítási) 4,0 millimól leucin és 20 ml víz 0- C° hőmérsékletű elegyéhez 3,1 mól N-karboxi-fenilalaninanhidridet adunk, miközben a pH-t báriumhid-55 roxidpor részletekben végzett hozzáadásával 10,5-ös értéken tartjuk. A reakció 1 perc alatt teljesen lejátszódik. 10%-os kénsavoldat hozzáadásával a pH-t 3,5-re állítjuk be. A kicsapódó báriumszulfátot szűréssel eltávolítjuk, és a fe-60 nilalanil-leucint tartalmazó szüredéket —3 C°-on 3,2 millimól N-karboxi-glicinanhidriddel kezeljük, miközben a pH-t báriumhidroxid hozzáadásával 10,5-ös értéken tartjuk. A dekarboxilezést úgy valósítjuk meg, hogy a pH-t tömény kénsavval 65 3,5-ös értékre állítjuk be, és a kicsapódó bárium-16