158024. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 17 967 RP antibiotikum előállítására

9 158024 10 asszimilálható, nitrogénforrást és szervetlen elemeket, továbbá esetleg növekedési faktorokat; mindezeket jól meghatározott vegyületek vagy bonyolult, termékek alakjában használjuk fél, mint azokat különféle eredetű biológiai termékekben találjuk. Asszimilálható szénforrásként félhasználhatók szénhidrátok, mint a glukóz, maltóz, dextrinek, keményítő, továbbá glicerin, mannit és bizonyos szerves savak, például tejsav, citromsav. Bizonyos állati és növényi olajok, mint a lardolaj vagy a szójaolaj, előnyösen helyettesíthetik vagy kiegészíthetik ezeket a .szénhidrátokat. Az alkalmas asszimilálható nitrogénforrások rendkívül változatosak. Lehetnek nagyon egyszerű vegyületek, mint áz ammónium szervetlen vagy szerves sói, a karbamid, bizonyos aminosavak; lehetnek továbbá a nitrogént fehérje alakjában tartalmazó bonyolult anyagok, mint a kazein, laktalbumin, siker és hidrolizátumaik, szójabab, amerikai mogyoróliszt, halliszt, húskivónat, élesztőkivonat, szeszmoslék, kükoricalekvár stb. A szervetlen adalékok közül egyeseknek pufferoló vagy közömbösítő hatása lehet, ilyenek az alkáli- vagy .földalkálifoszfátok és a kalciumkarbonát és magnéziumkarbonát. Másokra a Streptomyces roseopullatus, DS 20 073 törzs fejlődéséhez szükséges egyensúly biztosítására és a 17 967 RP termelésének elősegítésére van szükség, ilyenek az alkáli- és alká-. liföldfémkloridok és -szulfátok. Végül egyesek a Streptomyces roseopullatus anyagcseréjét aktiválják, ilyenek a cink, kobalt, vas, réz és mangán sói. A fermentációs közeg pH-ja a tenyésztés kezdetén 6,0 és 7,8 között lehet, előnyösen 6,5 és 7,5 között. A fermentáció optimális hőmérséklete 25—30 C°, de kielégítő termelés érhető el 23 és 33 C° között. A tenyészet levegőztetése széles határok között változtatható. Mindamellett azt találtuk, hogy a táptalaj literéré percenként 0,3—3 liter levegő jól megfelel. A-maximális hozamot 17 967 RP antibiotikumból a fermentáció 2—8. napján érjük el, az időtartam lényegében a használt táptalajtól függ. . A továbbiakhoz megjegyezzük, hogy a Strep^ tomyces roseopullatus, DS 20 073. törzs 17 967 RP antibiotikum termelése céljából való tenyésztésének általános körülményei niagymértékiben változhatnak, és alkalmazkodhatnak az adott körülményekhez. A 17 967 RP antibiotikum a fermentlevekből a következőképpen különíthető el:. A fermentleveket közvetlenül extraháljuk víz-, zel nem elegyedő oldószerekkel, például legalább 4 szénatomot tartalmazó alifás alkoholokkal, észterekkel, például etilacetáttal, klórozott szénhidrogénekkel, például diklóretánnal, mcülénkloríddal vagy kloroformmal. Ezt a művelétet előnyösen 7 pH-nál végezzük. Szűrés és dekantálás után a nyers termék elkülöníthető a fent említett szerves oldószerektől az oldatnak csökkentett nyomás alatt való koncentrálásával, majd az antibiotikumnak olyan oldószerrel, például hexánnal való kicsapásával, amelyben nem vagy rosszul oldódik. A 17 967 RP megtisztítható a szokásos módszerekkel, pl. átkristályosítással, különféle abszorbenseken való kromatografálással stb. Atkristályosításra a 17 967 RP antibiotikumot feloldjuk egy jó oldószerében, például dimetilformamidban, és.a kapott oldatot fokozatosan hígítjuk alkalmas rossz oldószerrel, például 50:50 térfogatarányú metanol-víz vagy aoeton-víz eleggyel. Kromatografálásra előnyösen kovasavgélt alkalmazunk. A 17 967 RP antibiotikumot leköttetjük az adszorbenssel akár úgy, hogy az antibiotikum oldatát egy jó oldószerben, például dimetilformamidban átboesátjuk az adszorbensoszlopon^ vagy az adszorbenst és az antibiotikumnak alkalmas oldateleggyel készült oldatát alaposan összekeverve pépet készítünk, amelynek a folyadékfázisát utóbb elűzzük. Ezután a 17 967 RP antibiotikumot aceton alapú oldószerekkel eluáljuk. Aceton helyett 50:50 térfogatarányú metilformamid-aeeton elegy vagy 78:20:2 térfogatarányú kloroförm-metanol-aceton elegy.is használható. A 1,7 967 RP antibiotikumot az eluátum koncentrálásával vagy a. fent ismertetett módon, rossz oldószernek az eluátumhoz való hozzáadásával nyerhetjük ki. Nyilvánvaló, hogy a különféle extrákciós, elkülönítési és tisztítási módszerek többször ismételhetők a szükségletnek megfelelően, hogy a kívánt alkalmazásnak megfelelő alakban kapjuk a terméket. A következő példákban szemléltetjük a találmány szerinti eljárás gyakorlati végrehajtását anélkül, hogy a találmányt ezekre kívánnánk korlátozni. A. továbbiakban az aktivitást mindig biológiai próbával határozzuk meg turbidimetrikus módszerrel, Staphylococcus aureus 609 P törzzsel érzékeny mikroorganizmusként. Az aktivitás egysége a tiszta kristályos termék 1 mikrogrammja. Ezt az aktivitást, azaz a termék titerét szilárd termékek esetében mg-onkénti egységekben (//./mg), oldatok esetében pedig ml-enkénti egységekben (u/ml) fejezzük ki. 1. példa Egy 350 literes fermentorba betöltjük a következő anyagokat: ' . kükoricalekvár (50% száraz extrák t tartalmú) .5 kg keményítő, részben hidrolizálva 7,5 kg csapvízzel kiegészítve 220 literre. 10 15 20 25 S0 35 40 45 50 55 60