158004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2'-amino-2'-dezoxi-kanamicin előállítására

21 158004 22 tartalmazó oldatból egy cseppet 40x2 cm méretű Toyo No. 50 szűrőpapírra viszünk fel, és 6:4:1:3 arányú butanol : piridin : ecetsav : víz eleggyel lefelé futtatjuk. A kapott papírkrornatogranimon három folt jelenik meg, egyküík ninhidrinnel és amnióniás ezüstnitráttal, a második csak ninhidrinnel, 'míg a harmadik csak ammonias ezüsitnitráttal ad pozitív reakciót. Ismert mintákkal végzett összehasonlítás során azt találtuk, hogy ez a három folt a deoxistreptaminnak, 6-am:ino-6-deoxi-D-glü!kóznak ill. a D^glüfcóznak felel meg. Ezen eredmény, és az NK—1001 antibiotikum molekulasúlyának ismeretében megállapítottuk, hogy az NK— 1001 amtibiotikum 1 molekula deöxistreptaminból, 1 (molekula 6-armno-6-deoxi-DHglülkóz)bó:l és 1 molekula D-glükózból felépülő új vegyület. Az NK—1001 antibiotikum lényegében nam toxikus, LD50 értéke egéren intravénás injekcióban meghatározva 3050 mg/kg. Az NK—1001 antibiotikumot úgy állíthatjuk elő, hogy a már korábban említett Streptomyees toanamyceticus 0—4—1 törzset aerób körülmények között szénhidrátot és nitrogéntartalmú' tápanyagot, valamint meghatározott mennyiségű streptidint tartalmazó táptalajon addig tenyésztjük, amíg az NK—10O1 antibiotikum a tenyészetben felhalmozódik, majd az antibiotikumot a tenyészettől elválasztjuk. Az NK—1001 antibiotikum fermentációs előállítása során ugyanazokat a szén- ós nátrogénf or -rásokat, és ugyanazokat a módszereket alkalmazhatjuk, amelyeket a 2^arnino-2'-deoxi-kanamicin előállítása kapcsán már ismertettünk, így pl- rázott tenyésztési vagy álló tenyésztési eljárást alkalmazhatunk. A tenyésztés hőmérséklete 25—35 C°, előnyösen azonban 28 C° vagy ennek közelébe eső érték lehet. A táptalajhoz adott streptidin mennyisége nem döntő jelentőségű tényező, a streptidint azonban gazdaságossági szempontokból a közeg súlyára-számított 0,05—l,0°/0-os, előnyösen 0,1—0,5%-os mennyiségiben alkalmazzuk. A streptidint a tenyésztés kezdetekor, vagy a tenyésztés folyamán adagolhatjuk be. Az NK—1001 antibiotikum izolálását és tisztítását a ,2'-aminö-2'-aeoxi-kanamicinnél ismertetett módon végezhetjük. Az NK—1001 antibiotikumhoz hasonlóan a iaaékanyagkénlt felhasználtató! NK—1003 antibiotikum ugyancsak új, á Gnam-,pozitív, Gram-negatív és savttűrő bafkitériuimokklal, iránt Bacillus subtilis, Lactobacillus fermentí, Shigella dyseniteriae stb. széniben hasznos antibakteriális hatást kifejtő antibiöitikus anyag. Az NK—1003 antibiotikum a Gram-poziitív, Gram-negatív és savtűrő baktériumok növekedését gátló, bázikus anyag, vízben, vizes metanolban, vizes etanolban oldódik, abszolút metanolban, abszolút etanolban, etilacetáitban, butilacatátban és benzolban oldhatatlan; ninhidrinnel, Elson-Morgan és Molisch reagensekkel pozitív reakciót ad, Sakaguchi, Tolfens, Fehling, Miliőn és Benedict reagensekkel azonban nem reagál; alkotóelemiekként szenet, hidrogént, oxigént és nitrogént tartalmaz, ként, halogént és hamut nem tartalmaz; tapasztalati képlete C12H25N3O7. Ez 5 az új antibiotikum színtelen, tűs, 202—205 C°on bomlás köziben olvadó kristályokat képez; 1%-ios vizes oldatának fajlagos forgatóképessége (a)21

o = +9:5°; az ultraibolya fényben 220—340 m/x hulMmhossztartö'mányiban nem 10 mutat abszorpciót (lásd: 5. ábra, abszcissza: hullámhossz, m/A, ordináta: abszorpció); Nujolban felvett infravörös abszorpciós spektrumában (6. ábra, abszcissza: hullámszám, cm"-1

, ordináta: transzmisszió %) jellemző abszorpciós 15 sávok jelennék meg. Az NK—1003 antibiotikum 6N sósavas oldatban 40 percig 100 C°-os hevítessél hidrolizálva antibiotikus hatását elveszíti. A kapott bidrolizált oldatot 40x2 cm méretű Toyo No. 50 szűrőpapínra Cseppentjük, és 6 : 4 : 20 : 1 : 3 arányú butanol : piridin : ecetsav : víz oldószeireleggyel lefelé futtatjuk. A kapott papírkromatogramban két, ninhidrinnel pozitív reakciót adó folt jelenik meg, amelyek egyike ammonias ezüstnitráttal is pozitív reakciót ad. 25 Ismert mintákkal végrehajtott összehasonlítás során azt találtuk, hogy ez a két folt a deoxistreptaminnak és 6-D-glükózaminnak felel meg. E tény és a molekulasúly isimeretében megállapítható, hogy az NK—1003 antibiotikum 1 mooQ lekula deoxisitreptaminból és 1 molekula 6-D-glükózaminból felépített anyag. Az NK—1003 antibiotikum lényegében nem toxikus, egéren intravénás injekcióban meghatározott LD50 értéke 1550 mg/kg. 35 Az NK—1003 antibiotikumot a következőképpen állíthatjuk elő: valamely Streptomyces kanaimyoeticus törzset szénhidrátot, nitrogéntartalmú tápanyagot valamint meghatározott mennyiségű NK—1001 antibiotikumot tartalmazó táptalajon aerób körülmények között addig tenyésztünk, amíg az NK—1003 antibiotikum a tenyészetben felhalmozódik, majd az antibiotikumot a tenyészettől elválasztjuk. Az NK—1:003 antibiotikum, fermentációs előálítáBia 45 során a i2'-amino-2'-deoxi-fcanaimicinnél ismer-tetett imódszereket és az ott leírt szén- és nitrogénforrásokat alkalmazhatjuk. Előnyösen levegőztetett mélytenyésztést végzünk. A tenyésztés hőmérséklete általában 25—30 C°, elő-50 nyösen 28 C° vagy ennek közelébe eső érték lehat. A táptalajhoz adott NK—1001 antibiotikum mennyisége nem döntő jelentőségű, az NK—1001 antibiotikumot pl. a közeg súlyára számított 0,05—1,0%-os, előnyösen 0,1—0,5%-os 55 mennyiségben alkalmazhatjuk. Az NK—1001 antibiotikumot a tenyésztés kezdetekor, vagy a tenyésztés folyamán adagolhatjuk be. Az NK—100:3 antibiotikum izolálását és tisz-60 títását a 2'^amino-2'-:deoxi-kianiamicinnél ismertetett módon végezhetjük. A 3. ábra az NK—1001 antibiotikum 1 mg/ /ml koncentrációjú vizes oldatának ultraibolya 65 abszorpciós spektrumát tünteti fel. 11