158003. lajstromszámú szabadalom • Fermentációs eljárás lizosztafin előállítására

9 158003 10 E kísérleteink eredményeit az alábbiakban foglaljuk össze; mindegyik nitrogéntartalmú tápanyagra vonatkozólag megadjuk a három különböző szénforrás alkalmazásával a tápközegben kapott pH-értéket és lizosztafin tartalmat. A fermentációs közeg pH-értékét az alábbi táblázatban megadott értékekre szabályozva, a táblázatban ugyancsak megadott inkubációs idő alatt az alábbi antibiotikum^hozamokat értük el: Enzimmel emésztett állati szövet (Medo Peptone, Wilson): glicerin: pH 7,10, lizosztafin 20 E/ml; dextróz: pH 5,60, lizosztafin 13,6 E/ml; galaktóz: pH 7,85, lizosztafin 28 E/ml. Pankreásszal emésztett szívizom (Myosate, Baltimore Biol. Lab.): glicerin: pH 7,50, lizosztafin 21,5 E/ml; dextróz; pH 5,65, lizosztafin 4,8 E/ml; galaktóz: pH 8,05, lizosztafin 19,2 E/ml. Pankreásszal emésztett zselatin (Gelatone, Difoo): glicerin: pH 5,50, lizosztafin 2,4 E/ml dextróz: pH 5,00, lizosztafin 1,1 E/ml galaktóz: pH 7,8, lizosztafin 4,4 E/ml Pepszinnel emésztett állati szövet (Thiotone, Baltimore B. L.): glicerin: pH 7,65, lizosztafin 14,9 E/ml; dextróz: pH 5,40, lizosztafin <0,2 E/ml; galaktóz: pH 8,00, lizosztafin 16,0 E/ml. Oldható állati fehérje (Swift, SS A/P): glicerin: pH 6,40, lizosztafin 5,2 E/ml; dextróz: . pH 4,70, lizosztafin <0,4 E/ml; galaktóz: pH 7,30, lizosztafin 0,7 E/ml. Mindegyik fermentációban a S. staphylolyticus inokulum 'kitűnő fejlődést mutatott. Bár a különböző fajtájú szerves nitrogén^tápanyagok az antibiotikum-termelés szempontjából különböző hatásúak voltak, e kísérletek mégis azt mutatták, hogy mindegyik fajta nitrogéntartalmú tápanyag esetében a glicerinnel és a galaktózzal számottevően jobb antibiotikum-hazam volt elérhető, mint dextróz szénforrás-tápanyagként váló alkalmazásával. Egy további kísérletsorozatot végeztünk annak megállapítására, hogy mi az optimális pH-tartomány abban az esetben, ha glicerin asszimilálható szénforrás-tápanyagként való alkalmazásával termelünk lizosztafint S. staphylolyticus mikroorganizmussal. Olyan rozsdamentes acél fermentorral dolgoztunk, amely önműködő berendezéssel volt felszerelve a fermentációs közeg pH^értékének az inkubációs idő folyamán sav vagy lúg hozzáadása útján történő szabályozására; a fermentorban 20 liter alábbi összetételű tápközeggel folytattuk a fermentációt : enzimmel hidrolizált kazein 4,82 súly% szója^pepton 0,5 súly% nátriumklorid - 0,5 súly% dikáliumhidrogénfoszfát 0,25 súly% glicerin 1,0 súly% Maximális lizosztaf in-hozam pH-értiékeknél: különböző 10 15 20 25 30 35 40 45 pH-érték idő lizosztafin E/ml 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 17 óra 13 óra 13 óra 13 óra 13 óra 15 óra 12 óra 12 óra 18 óra <0,2 <0,2 2,7 7,2 19,0 17,8 19,2 10,0 <0,2 Űgy találtuk tehát, hogy a lizosztafin-termelés szempontjából a 6,5 és 8,5 közötti pH-tartomány a legelőnyösebb. Különösen előnyösnek bizonyult — az elért magas antibiotikum-titerekre való tekintettel — a 7,0 és 8,0 közötti pH-tartomány. Hasonlóan lefolytatott kísérletékben ugyanezt a pH-tartományt találtuk előnyösnek olyan esetekben is, amikor dextrózt alkalmaztunk szénforrásként, nitrogénfoirásként pedig enEíimimel hidrolizált kazeint 4,0—10 súly% mennyiségben. A leírásban a „nitrogént szolgáltató tápanyag" ill. ,,szénforrás-tápanyag" kifejezés alatt olyan, a fermentációs közegben tápanyagként alkalmazható anyagokat értünk, amelyeket a S. staphylolytikus mikroorganizmus asszimilálni és fejlődéséhez felhasználni képes, vagyis amelyek jelenlétében e mikroorganizmus össz-sejtsúlya növekszik és a mikroorganizmus lizosztafin-antibiotikuimot termel. Ezeket a fogalmakat a szakmäfoan ilyen értelemben szokták használni. A találmány szerinti eljárás a fentebb példa-50 képpen leírt különböző kiviteli módokon kívül azonban természetesen még számos más módon is megvalósítható. Ezért a fentebbi leírás a találmány szerinti eljárás kivitelezési módjai szempontjából semmiképpen sem tekinthető 55 korlátozó jellegűnek, hanem a találmány az alábbi igénypontok körén belül bármely, a szakmabeli számára kézenfekvő változtatásokat képező módosítással lefolytatható. 60 Szabadalmi igénypontok: 1. . Eljárás a lizosztafin antibiotikum előállítására Staphylococcus staphylolyticus mikroor-65 ganizmus törzs alkalmazásával, szénforrást és S