157985. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oleficin és sói előállítására mikrobiológiai úton
5 157985 6 talaj térfogatának 10%-a. A fermentáció során az anitibioitikum-tartalo'm a 65—68. órában éri el a 330—360 y/ml oleficin értéket. A mikroszkópi képben a 48. órában a micéliumofc erős fragmentálódása figyelhető meg. Az antibiotikum-kon cenitráció ékkor 140—180 y/ml. A fermentáció a 65—68. órában befejeződik és 60—70% fragmentáció tapasztalható. Az olefiein-koncenítráció további tenyésztés esetén esik. Az antibiotikum az erjesztéses oldat pH-jának keverés közben 4-re történő állítása után teljesen a micéiiumoh halmozódik fel, amelyből extrakciós módszerrel nyerhető ki. Ä nedves micélium extrahálását vízzel legalább részlegesen elegyedő neutrális szerves oldószerékkel, pl. alkoholokkal (metanol, etanol, butianol sitfo.), ill. acetonnal végezhetjük. Az oleficin az oldószeres kivonat vízig történő bepárlási maradékából valamely vízzel nem elegyedő poláros oldószerrel, pl. észterrel vagy magasabb C^atomszámú alkohollal (pl. etilacetát, butanol stb.) kivonható, majd bepárlás után apoláros oldószerrel (pl. petroléter, ciklohexán stb.) eldörzsölve a maradékot, szűrés után a nyers antibiotikumot nyerjük. Az így kapott oleficin metanolban és acetonbán jól oldódik, etilacetátiban közepesen, benzolban gyengén. Vízben oldhatatlan, azonban alkálisói, melyek hidrogénlkiarbanáttal állíthatók elő, vízben oldódnak. A nyers oleficint n-propanol-etilaceitát-0,25 n NH/1 OH=6 : 1 : 4 rendszerben, 5 pH-jú inaktivált alumíniumoxid 'oszlopon kromatográfálással tisztítottuk. Az így nyert termék 900—1000 y/mg biológiai aktivitásit mutatott. Az oleficin öiSszegképlete QjgHssNOio- '• Patencioiríetriás titrálás aliapján egyenéiritéksúlya a molekulasúly felével egyenlő. Infravörös színiképébői —mely eltér az ocbramicinétől — megállapítható, hogy a vegyület konjugált telítetten csoportokat tartalmaz. Hidroxil-, amin- vagy észitercsoportok nem mutathatók ki, amid jelenléte valószínű. Karbonsav, ill. karboxiláit szintén, kimutatható, ami összhangban van a vizes hidrogénkarbo'nát oldatban végbemenő sóképzéssel és oldódással. A csatolt ábrán az oleficin infravörös színképéi r lutatjuk be (az elnyelést a hullámszám függvén j ében). Ultraibolya elnyelési szíriképe metanolban 262 és 420 rn.M~nál mutat maximumot. Az utóbbi igen széles maximum 0,01 n metánolos sósavban 465 mu-m, 0,01 n metanolois nátriumhidroxidban pedig 415 m: «-ra tolódik el. A széles abszorpciós maximumból szintén poliérnszerkezetre lehet következtetni. A limjokroícin színképében szódaoldatbam 260, 420 és 445 niu-nál lép fel abszorpciós maximum, az ochramicinnél pedig 235, 375, 400 és 420 m/i-nál. Mindhárom antibiotikum tömény kénsavval sötétkék, múld színreákció't ad. Az oleficin kloroformos oldatában antimon-triklorid hatására szintén kék színreakció lép fel (Carr-Price reakció), ami a konjugált poliének általános sajátsága. Ha az oleficint gőzfázisban brómozzuk, több mint háromszoros súlynövekedés lép fel brómaddíeió következtében. Katalitikus hirogénezésnél az oldat eredetileg vörös színe halványsárga 5 lesz, és a 420 rn.fi környezetében fellépő abszorpciós maximum eltűnik. Rétegkramatográfiás vizsgálatok Kieselgel-G rétegen: 10 15 30 35 40 45 50 55 Oldószer rendszer R érték (oleficin) Propanol-étiliacetáit-0,25 n NH4 OH (6:1:4) Butaniol-ecetsav-víz (4:1:5) Etanol-víz-NH4 OH (8:1 : 1) Benzol-etilacetát (1:1) 0,60 0,79 0,62 0.10 20 Az oleficin metánolos oldata az antifungális polién makrolid .antibioitikumokkal ellentétben napfényre nem érzékeny. Levegő átbuborékoltaitása sem csökkenti az oldat biológiai aktivitását. Sav hatására elveszti aktivitását, alkáliák-25 kai szemben kevésbé érzékeny. Metánolos oldata szobahőn 4—8 napig változatlan hatóértékű. Anitibak'terialis spektrum (in vitro); legkisebb hatásos koncentrációk (//ml) megfigyelési idő után 24 órás, ül. 48 órás Pseudomonas pyocyanea 100 felett Coli Óm 100 felett Coli 4R 100 felett Coli 6R 100 felett Shigella sonnei 100 felett Staphylococcus 53 0,4 alatt 0,4 alatt Staphylococcus 8/81 0,4 alatt 0,8 Sta phylococcu s 1115 0,8 1,6 Staphylococcus. Duncan 0,4 alatt 0,8 Sarcina flava. 0,8 0,8. Subt. ATCC 663:3 0,4 alatt 0,4 alatt Str. faeoalis 3,1 50,0 Intravénásán adott LD50 értéke 40 mg/kg. Az oleficin Yoshida sc. sarcomán daganatgátló hatással rendelkezik. Az ochramicin gátolja a Gram-pozitív, valamint a saválló schizomiceták növekedését, Gram-inegatívokra hatástalan. LD50 értéke intraperitoneális adagolással egereken 25 mg/kg. A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példákkal szemléltetjük: 60 1 • példa A Streptoimyces parvulüs (A—461) burgonyakivonat-glükóz agárról nyert spóraszuszpenziójával egy 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban 65 beoltattunk 100 mii alábbi összetételű táptalajt: 3
