157972. lajstromszámú szabadalom • Eljárás elsősorban tejfehérjét kicsapó vagy elsősorban proteolitikus hatású enzim-készítmények előállítására a Mesentericus-subtilis csoportba tartozó baktériumokkal
^•ftsrtm»'0' ./ 157972 15 5. példa A torzs izolálása. A subtilis törzshöz tartozó baktériumot paradicsom felületéről izoláltuk, húskivonatagarra vittük és tenyésztettük. A kapott kolóniákat 20% lefölözött friss tejet, 1% zabdarát, 1% .árpadarát, 1% búzakorpát és 1,1% reszelt nyers burgonyát tartalmazó táptalajban 121 °C-on 40 percen át sterilizáltuk (pH a sterilizálás után 6,5—6,7), átoltottuk és 24 órán át 220/perc kilengésű rázógépen 30 °C-on rázattuk. Ezt követően meghatároztuk a kultúra tejfehérjét kicsapó aktivitását Hostettler és Stein módszere szerint (Landwirtschaft. Jahrbuch der Schweiz 68, 291—368 [1954]). Ily módon kiválasztottuk a legaktívabb törzseket. A táptalaj minden 0,1 ml-ét 10 ml steril lefölözött friss tejbe vittük, és 36—48 órán át 30 °C-on inkubáltuk. Ezután a kultúrákat 4 héten át 20 hűtőszekrényben 4 °C-on tárolhattuk. A tárolt kultúra csíraszáma kb. 5xl08/ml volt. 10 A törzs azonosítását Bergey-féle módszerrel végeztük (1. Manual of Determinative Bacteriology, 7. kiadás, Baltimore, 1957.) Szelektálás céljából a tisztán tenyésztett, enzim-képzésre vizsgálandó baktériumokat először Donovan—Vincent-féle kettős indikátoragárra (Journ. Dairy Res. 22, 43—47 [1955]) oltjuk. A szelektált Bacillus subtilis törzs ezen a táptalajon a kolóniák körül először kicsapta, majd hidrolizálta a proteint. Ezután az izolálást a fentiek szerint végeztük. Szabadalmi igénypontok: 25 35 1. Eljárás a táptalaj összetételétől függően tejfehérjét kicsapó vagy elsősorban proteolitikus hatást kifejtő enzimkészítmény biotechni- 40 kai úton való előállítására a Mesentericussubtilis csoportba tartozó baktériumok segítségével, azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmusokat a természetes szubsztrátból izoláljuk, enzimaktivitásuknak megfelelően szelektáljuk, a baktériumok fenntartóközegeként és inokulum-táptalajként használt lefölözöt friss tejet tartalmazó táptalajt kényszerlevegőztetett szubmersz-tenyésztésnek vetjük alá, melynek során az áthaladó levegő mennyisége 0,25— 0,5 l/perc, előnyösen 30 liter levegő/100 liter tápfolyadék percenként és 1:3 keverőátmérőtartályátmérő arány esetén a keverés sebessége 100—250 fordulat/perc, majd az enzim-tartalmú tápfolyadékot centrifugáljuk és vákuumban 1:8—1.14 arányban bepároljuk, adott esetben az enzimkészítményt a tápfolyadékból ammóniumszulfáttal, tanninnal vagy szerves kicsapószerekkel, pl. acetonnal, etilalkohollal, izopropilalkohollal kicsapjuk és szárítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás föganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy elsősorban tejfehérjét kicsapó enzimkészítmény előállítására termelő közegként 10—30%, különösen 20% soványtej, 0,5—2%, különösen 1% búzakorpa, 1% zabdara, 1% árpadara és 0,01— 0,08%, különösen 0,01% KH2 P0 4 , 0,05% (NH/,)2 S04 és 0,01% MgSO/, keverékét tartalmazó táptalajt alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy elsősorban proteolitikus hatású enzim-készítmény előállítására termelő közegként 1—2%, különösen 1,5% reszelt nyers burgonya, 1% árpadara, 1% búzakorpa, 1% zabdara, 0,01—0,05%, különösen 0,03% kukorica-áztatóvíz, 0,2—0,75%. különösen 0,5% burgonyakeményítő és ásványi sók, így 0,01—0,05%, különösen 0,02% CaCl2 keverékét tartalmazó táptalajt alkalmazunk. A kiadásért íelel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7008553. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 4
