157957. lajstromszámú szabadalom • Stabil, szilárd reagens-elegyek és eljárás ezek előállítására
3 157957 4 géns-elegyeket biztosítson. A reagens-elegyekben levő stabilizátorok, amelyek a találmány alapját képezik, olyan irányban hatnak, hogy megtartsák vagy állandósítsák az egyes komponensek és a teljes reagens-elegy aktivitását. Az 5 egyes komponensek, beleértve azokat is, amelyek enzimeket tartalmaznak, külön-külön stabilizálhatók és mint olyanok, bármely kívánt célra felhasználhatók. Tehát a komponensek más, új reagens-eleggyé kombinálhatók egymással. A keletkező reagens-elegy ezért, tartalmazni fogja a folyékony reagens készítéséhez szükséges összes komponenst a víz kivételével, amely reagens a fent leírt típusú biológiai meghatározás elvégzésére alkalmas. Egy meghatározás elvégzéséhez a találmány szerinti elegy egy egységének tartalmát előre meghatározott mennyiségű vízzel összekeverjük, s így az egy meghatározáshoz szükséges folyékony reagenst állítjuk elő. Előnyös töltő- és stabilizálószer a mannit. Egyéb hasonló polihidroxi-vegyületek ugyancsak felhasználhatók erre a célra. A jelen esetben a meghatározandó ismeretlen komponensek négy csoportba oszthatók. Az első csoport az enzimeket, így a karboxilázokat, dehidrogenázokat, hidrolázokat, izomerázokat, oxidázokat, foszforilázokat és transzferázokat foglalja magába. Ebbe a csoportba tartoznak pl. a következő anyagok: tejsav-dehidrogenáz, lúgos foszfatáz, glükóz-oxidáz, izom-foszforiláz, glutaminsav-oxálecetsav-transzamináz, foszfoenolipiroszőlősav-karboxiláz, kolinészteráz, glutaminsav-piroszőlősav-transzamináz, almasav-dehídrogenáz, savas ifoszfatáz, prosztata-savas foszfatáz, észteráz, diészteráz, lipáz, amiláz, szorbit-dehidrogenáz, glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz, izocitromsav-dehidrogenáz, alfa-hidroxi-vajsav-dehidrogenáz, aldoláz, glutaminsav-dekarboxiláz, urikáz, galaktowaldenáz, trióz-foszfát-izomeráz, szénsav-anhidráz, leucin-aminopeptidáz, 3-foszfoglieeraldehid-dehidrogenáz, tripszin és kimotripszin. Ide tartoznak a kinázok, így a kreatin-kináz is. A második csoportba a biokémiai közbenső termékek vagy metabolitok tartoznak. Ebbe a csoportba soroljuk pl. a következő anyagokat: glükóz, tejsav, piroszőlősav, adenozintrifoszfát, fenilpiroszőlősav, 3-metoxi-4-hidroxi-mandula-sav, koleszterin, kreatin, kreatinín, karbamid, karbaminsav, aszparaginsav és glicin. A harmadik csoportba a sejtek vagy biológiai folyadékok kémiai alkotórészei, pl. a széndioxid, trigliceridek, protein, keményítő, glikogén, hemoglobin és inzulin tartoznak. A negyedik csoportba a drogokat és toxinokat, így az antimicint, diizopropilfluórfoszfátot, szulfatiazolt, etanolt, acetaldehidet és barbiturátokat soroljuk. A mintában levő ismeretlen anyag meghatározására a találmány szerinti stabilizált reagens-elegy ékből készített folyékony reagenst a mintával összekeverve enzimatikus reakciót hozunk létre. A végbemenő reakció fizikai hatást eredményez, amely könnyen mérhető; pl. a reagens-elegy optikai sűrűsége néhány előre meghatározott hullámhosszon változhat a reakció mértékének arányában. A reagens-elegy egységének és a minták öszszekeverésekor, amikor a kívánt változás — pl. az optikai sűrűség változása — megtörténik a reagens-elegyben, a rendszerben reakcióba lépő szubsztrátum, a reakciót katalizáló enzim és egy koenzim van jelen, amely .a reakció folyamán oxidálódik vagy redukálódik. Az összes olyan komponenst, amely magában a mintában nincs jelen, a stabilizált reagens-elegy tartalmazza. A reagens-elegy továbbá egy vagy több olyan anyagot — előnyösen mannitot — tartalmaz, amely stabilizálja az elegyet és tartósítja a különböző komponensek aktivitását. Ezen kívül az elegyben egy vagy több puffer is jelen lehet, amelyek a reakció megvalósításához szükséges körülményeket a reagens-elegyben optimális értéken tartják. Ha a meghatározandó ismeretlen egy enzim, á reagensnek nem kell szükségszerűen enzimet is tartalmaznia. A találmány szerinti elegy egy előnyös kiviteli alakja szerint a reagens-elégy enzimmentes, de egy vagy több olyan komponenst, így pl. szubsztrátumot tartalmaz, amely olyan sebességgel vagy mértékig reagál, amit a mintában eredetileg jelenlevő ismeretlen anyag vagy enzim aktivitásának mértéke határoz meg. A reagens-elegy további előnyös kiviteli alakja szerint az elegy egy szubsztrátumot tartalmaz, amely az ismeretlen anysggal reagál, és a reagens továbbá olyan enzimet is magában foglal, amely a reakciót katalizálja. Egy ilyen reagens-elegy előállítása céljából először egy vagy több olyan szubsztrátumot és enzimet választunk ki, amelyek enzimatikus reakciót váltanak ki, és biztosítják annak a kívánt módon való lefutását. A kiválasztott különleges enzimek természetesen a meghatározandó ismeretlentől és a megvalósítani kívánt reakciótol függnek. Mégis az enzimeket általában a karboxilázok, dehidrogenázok, hidrolázok, izomerázok, oxidázok, foszforilázok és transzferázok közül választjuk. Ilyen anyagok pl. a tejsav-15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Ez lehetővé teszi, hogy a reagens-elegyet ' olyan tartályokba csomagoljuk, amelyek könynyen kezelhetők és használhatók. Az egyes tartályok olyan mennyiségű reagens-elegyet tártai- 2 o máznak, amely éppen meghatározott számú mérés, pl. egy kísérlet elvégzéséhez elegendő. A találmány szerinti reagens-elegy stabilizáló- és töltőanyagot tartalmaz, amely egyrészt a reagens-elegy térfogatát standard értékre növeli, 55 ezáltal az egy kísérlet elvégzéséhez szükséges reagens-elegy mennyisége mindig állandó menynyiség lesz, másrészt a reagens-elegy enzimkomponenseit stabilizálja. 2.
