157693. lajstromszámú szabadalom • Stabilis reagens-elegy
157693 A táblázatból világosan kiitűndk, hogy a különböző kömyiezefti körülményiek csak osekély hatást gyakorolnak a p-nitrofenol felszabadulására. A fentiekben már kifejtettük, hogy a találmány szerinti meghatározás kedvező hatásai a reakció rendűségémek megfigyelhető változása nélkül érhetők el. Ezt az alábbi adatok szemléltetik. Hyland-tfóle kontroll-saérumból, amely meghatározott mennyiségű alkalikus foszfatáz enzimet tartalmazó liofilizált humán szérum, hígításokat készítettünk. A nemzetközi egységszámot (/imól alkalikus foszf atáz/perc/liter) az alábbi egyenlet szerint számíthatjuk ki: nemzetközi összagység térfogat 1000 liter szérum -=A4i5 m^/perc 17,7 ml szérum l0 Reagens tablettát készítünk az alábbi komponensekből : 15 850 mg Na2 C0 3 50 mg magnéziumaszpartát 600 mg p-NPP-trisz 2830 mg mannát 250 mg banboviiasz 4000 1. 1 ampulla Hyland-szérum+5 ml deszt. víz 2. 2,5 ml 1. + 2,5 ml deszt. víz 3. 2,5 ml 2. + 2,5 ml deszt. víz 4. 2,5 ml 3. + 2,5 ml deszt. víz Elméleti egységszám 183 N. E. 91,5 N. E. 46 N. E. 2.3 N. E. 20 25 Az alkotórészeket összekeverjük és taibleitltázzuk. A fenti mennyiségből 33 db 'tablettát készíthetünk, 1—1 tabletíta 137 mg reagens-keverékeit tartalmaz. A meghatározást úgy, végezzük, hogy ja reagens tablettáit 3,0 ml víziben feloldjuk, lemérjük az* oldat exitánkcióját, hozzáadunk 20 [Á szérumot, majd 10, 20 és 30 perc elteltével rendre meghatározzuk az oldatok optikai sűrűségét. A kapott eredményebet az alábbi táblázat szemlélteti. Reagens optikai sűrűsége 1. 2. 3. 4. 0,167 0,168 0,160 0.159 Reakcióelegy optikai sűrűsége 10 20 perc múliwa 0,595 0,960 0,380 0,600 0,225 0,340 0,200 0,250 Optikai sűrűség R!ea kcióelegy változás qptikai sűrűsége 10' 30 pere múlva Optikai sűrűség változás 20' 0,037 0,022 0,011 0,005 1,350 0,795 0,450 0,300 0,038 0,21 0,011 0,005 A fenti eredmények világosan tükrözik az. enzimatikus reakció sebessége és az enzimkoncentráció közötti arányosságot, azaz hogy az optikai sűrűség lineárisan változik a hígítással. 45 Az adatok falapján kiszámítottuk a nemzetközi egységeket. A. oldat: 100 ml desztillált víziben feloldjuk az alábbi anyagokat: 850 Na2 C0 3 205 mg N;aHC03 50 mg magnéziumaszparítlált 315 mg p-NPP-di(ciklohexilammónium)-só Nemzetközi egységek 50 10' 20' AiEiage 1. 313 322 318 2. 186 177 181 3. 93 93 93 4. 42 42 42 5. példa: B. oldat: frissen készített A. oldat 10 ml-óben feloldunk 1000 mg mannitot. Az A. és B. oldatokat ezután az alább is-55 mertetett módon négy reagenssé egyesítjük. 1. reagens: 3 ml desztiíllállt víz 2. reagens: 3 ml A. oldat + 0 ml B. oldat (A reagens 0 mg/ml mannit koncentrációjú) 60 Enzimatikus eljárás alkalikus foszfatáz meghatározására és a mannáJt erre gyakorolt hatása gs 3. reagens: 2 ml A. oldat +1 ml B. oldat (A reagens mannit koncentrációja 33 mg/ml)
