157660. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polimixin D termelésére
3 az általunk megadott fermentációs körülmények között — messze meghaladj a. az irodalomból ismert egyéb polimixin-féleségeket termelő törzsekét. Ezen törzsizolátumot Bacillus polymyxa PiO jelzéssel láttulk el. Ez ia felismerásunk határozottan rámutat ama, hogy ia minimális szerkezeti eltérést mutató laratibiotikuimoik biaszintéziisének menete közöitt igen nagy eltérések lehetségesek. Kísérleteink folyamán azt találtuk, hogy a különböző polimix4nek optimális termelése elsősorban a felhasznált szénhidráttól és annak adagolási módjától függ. Az összes szénhidrátok között a polimixin D-termelés szempontjából optimális a laktóz, melynek termelésnövelő hatását kis mennyiségű glükóz vagy szacharóz elősegíti, de utóbbiak önmagukban a termelés biztosításához nem elegendők. A laktóz mellett komplex . fehérjót is előnyös a táptalajhoz adni, mely célra tejsavópor és embergyógyászati készítmény előállítására felhasznált állati máj maradéka alkalmas. Polimixin D termelésével kapcsolatos kísérleteink folyamán továbbá azt a meglepő megfigyelést tettük, hogy ha az antibiotikum-iparban szokatlanul enyhe táptalajsterilizálási körülményeket alkalmazunk, úgy a fermentációs értékek erősen emelkednek. A találmány eljárás magas termelési értékű polimixin D tartalmú fermentlé előállítására Bacillus polymyxa tenyésztésével. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a mikroorganizmus tenyésztésére használt szerves és szervetlen nitrogénforrást, anorganikus sókat, valamint adott esetben biogén stimulátorokat tartalmazó táptalajhoz energiaforrásként 2—6 súly% előnyösen 3,5—4,5 súly% laktózt (tejsavóport) és adott esetben 0,1—0,5 súly% glükózt vagy szacharózt adagolunk. Célszerű a táptalajt 0,1—3% mennyiségű szójaliszttel kiegészteni, és a hősterilizáláshál úgy eljárni, hogy a diammónium-hidrofoszfátot és tejsavóport a táptalaj többi alkotórészeitől elkülönítve, enyhe körülmények között sterilizáljuk. A találmány szerinti eljárás alkalmazásával az eddig ismerteknél magasabb termelési szintet sikerült biztosítani polimixin D előállítása céljából. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa A II. táblázatban ismertetett kísérleteket 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban végeztük síkrázógépen, 28 C°^on, és a fenmentllevek poliimixúi D^tartalmát nemzetközi polimixin B-standardra vonatkoztatva a 72. órában határoztuk meg. A kísérletek során az oltást Bacillus polymyxa PiO jelzésű »törzs spóraszuiszpenziójávai végeztük. Mindegyik táptalaj tartalmazza az I. táblázatban feltűntetett anyagokat, amelyekhez a II. táblázatban feltűntetett cukorforrásokat, ill. 4 fehérje-tartalmú anyagokat adagoltuk. A kísérleteket természetesen steril köruknények között végeztük. 5 A II. táblázatból kitűnik, hogy szemben a glükózzal vagy a tiszta laktózzal, a tejsavópor már önmagában — egyéb komplex nitrogénforrások nélkül — is rendkívül magas termelési értéket biztosít, ami szójaliszt hozzáadásával kismérték-10 ben fokozható. 2. példa A szokásos módon kevertetett és levegőztetett üzemi fermentorban az 1. példában megadott 4-es jelzésű táptalajt használva, 100 liter térfogatban készítettünk inokulumot, amelyet a Bacillus 20 polymyxa törzs PjO spóráival oltottunk be, majd 16 óra hosszat tartó tenyésztés után 1000 liter, a II. táblázatban 4-es, illetve 8-as sorszámú kísérletnek megfelelő táptalajba oltottunk. 25 A táptalaj sterilezése a következőképpen történt: Külön sterilizáltuk a diammónium-hidrogénfoszfátot és az ammóniumszulfátot 1 atm nyomáson 30 percen át oldatban 14%, ül. 2% koncentrációban, továbbá külön a tejsavóport 30 (25%-os oldatban) ugyancsak 1 atm nyomáson 30 percen át. A táptalaj többi alkotórészének sterilezése a fermentorban történt ugyancsak 1 atm nyomáson, de 40 percen át, és a külön sterilizált táptalaj-alkotórészeket 100 C° alatti hő-35 mérséklet alá hűtve steril körülmények között adagoltunk a fenmienitorba. A 4-es (táptalajon 55 200, 50 800, ill. 57 600 IE/ml termelést, a 8-as táptalajon pedig 67 200, 88 800, ill. 81 600 IE/ml termelésit (kaptunk. I. táblázat Polimixin D-tarmelő aiaptáptaílaj (NH4 ) 2 HP0 4 0,7 % (NH4 ) 2 S0 4 0,1 % MgS04 0,001% MmS04 0,001% FeS04 0,001% NaGL 0,1 % KCl 0,1 % Éleszt őkiivan at 0,3 % CaC03 2,0 % Csapvíz 100,0 % pH steiilezés előtt 7,6. Sterilezés 121 C°-on (1 atm) 12 perc rázólomibikak esetében. A názólombikok CaC03 -tartaümát, és a fermentorok (NH4 ) 2 HP0 4 -tartalimát külön sterilizáljuk az NH3 felszabadulás elke«^ rülése érdekében. 2
