157650. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus anyag, valamint ez anyag származékainak előállítására
23 157650 24 szűrünk a micéliumtól. A kapott szűrletet és a szűrőlepényt 4:1 arányú aceton :0,ll n vizes kénsavoldait elegyfben szuszpendáljuk, és 2 órán át keverjük. A folyadékot leszűrjük, és a lepényt még kétszer keverjük. A kapott extraktumokat egyesítjük, semlegesítjük, és az aoetont vákuumban lepároljuk. A fcb. 0,25 g Adriamycint tartalmazó koncentráturnot 1 n. sósavval pH =. 3 értékre savanyítjuk, majd kloroformos extrakcióval a szennyezések egy részét eltávolítjuk. A vizes fázist 1 n nátriumhidroxid-oldattal pH = 8,6-:ra lúgosítjuk, majd 9:íl arányú kloroform-metanol eleggyel extraháljuk. Ezt a műveletet addig ismételjük, míg a vizes fázis el nem színtellenedik. A metanolos4dorof ormos, extraktokat 8,6 pH-jú vízzel mossuk, vízmentes nátriuimszulffát fölött szárítjuk, szűrjük, csökkentett nyomásán kis térfogatra bepároljuk, és a maradékíból az Adriamycint etalétetrriel szafbad bázis formáj álban kicsapjuk. 1,50 g nyersterméket kapunk, amely k|b. 0,2 g Adriamycint tartalmaz. A szűrletet 1 n nátriumhidroxád-oldattal pH = 8,6nra lúgosítjuk, majd 9:1 arányú kloroform metanol eleggyel extraháljuk. Ezt az eljárást kétszer megismételj ük. A metanolias-klorofoirmos extraktokat 8,6 pH-jrú vízzel mossuk, majd 0,01 n sósavval addig extraháljuk, ,amíg a vizes fázis vörös színt nem vesz fel. A kloroformos fázist eltávolítjuk. A vizes fázist, leszűrjük és 1 n nátriumhidroxid-oldáttal pH = 8,6-;ra lúgosítjuk. Az oldatot ezután 9:1 arányú klarolf arm :imietanol eleggyel extraíháljuk. Az extraktumat, amely ekkor a különféle szennyezések mellett 0,15 g Adriamycint tartalmaz, 8,i6 pH-jú vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfát fölött szárítjuk, szűrjük, és csökkentett nyomáson kis 'térfogatra bepároljuk. 10 Itérfögatirész etiiléter hozzáadására csapadék alakjában 1 g nyerstermék válik ki, amely 0,12 g Adriamycint tartalmaz. Összesen 0,i320 g Adriamycint kapunk a nyers bázis formájálban. 7. piálda: 0,5 g, kb. 15% Adriamycint tartalmazó nyerstermékét 10 ml, 5,4-ies pH-jú 1/15 mólos foszfátpuff erben oldunk. Az oldatot 10 g oelilulózponon (Whatman CF 11) adszorbéáltatjuk, az elegyet éjszakán át vákuumban vízmentes kalciumklorid fölött szárítjuk, majd ß,4-es pH-jú 1/16 mólos foszfátpuffenrel előzetesen puifferolt 225 g oellulózport (Whatman CF 11) tartalmazó kromatográfiás üvegoszlopra visszük, és vákuumban vízmentes kalciumklorid fölött szárítjuk. A itermiéket 7:1:2 arányú propanol:etilacetát-jvíz eleggyel eluálrjuk, és automatikus mintavevőiben 25 ml-es frakciókat gyűjtünk össze. A különböző frakciókat pH = 5,4-re pufferolt Whatman Nr. 1. papíron kromatografálva vizsgáljuk, eluálászerként az oszlop eluálásához felhasznált elegyet alkalmazzuk. A 40-— 60 frakciók Adrámycint tartalmaznak. A kivált sókat szűrjük, a szűrletet 200 ml vízzel elegyítjük, és az oldat pH-ját 1 n nátriumhidr-5 oxid oldattal 7-re állítjuk. Az oldatot csökkentett nyomáson 50 ml térfogaltra bepároUjuk, a konoentmáitiuni pH-ját 8,8-ra állítjuk be, miajd klonoformmal extraíháljuk. Ezt a .műveletet háromszor megismételjük, 10 majd a kloroformos extraktokat egyesítjük, 8,6 pH-jú vízzel, majd közönséges vízzel mossuk, vízmentes náfeiuimszuMát fölött szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson 5 ml térfogatra betöményítjük. A maradékhoz 15 0,15 ml 1 n absz. miötanolos sósavoldatot adunk, és lehűtjük. Néhány pere múlva kristályos csapadék formájálban Adriamycin-taidiraMorid képződik. A csapadékot leszűrjük és hideg kloroformmal, majd vízmentes etiléterrel mossuk. 20 50 mg terméket kapunk, amelyet etanolból átkristályosítunk. Ily módon 35 mg tiszta, 204—205 C°-on olvadó terméket kapunk. Az lanyalúgból amorf 25 anyag alakjában 15 mg 90%-os tisztaságú termiek kapható. 8. példa: 30 0,077 g Adriarnydnnhidrdkltoridot 4 ml 0,5 n sósavban oldunk és 1 órán át 100 C°-on melegítünk. 35 Sötétvörös amorf- csapadékot kapunk, amelyet lehűtés után szűréssel összegyűjtünk. A csapadékot vízzel a mosófolyadék semlegességéig mossuk, és a kimosott termákat éjszakán át váfcuumlban káliumhidroxid fölött, majd 6 40 órán át 56 C°-on ifoszforpentoxid fölött szárítjuk. A fenti eljárással .az Adriamycdn aglükanját kapjuk. Termelés: 47 mg, op.: 223—224 C°, *' («)D — +1516° i(idioxán). Tapasztalati képlet: Cj^HiaOg-A glükon kiválása után a csaknem színtelen savas vizes oldat a Fehling-oMatat redukáló, 50 és niinihi'drinnel pozitív reakciót adó vegyületet tartalmaz. Az oldatot 1 x 8-as DowexR „ioncserélő gyantán ^bilkarbonátfoirmájú) átvezetve pH = 6nra semlegesítjük. A gyantát .kiszűrjük és a szűríetqt Idofilizáljuk. A fehér maradék 55 amiinocukor, amely a Daunosamin-hiidroklorid tulajdonságaivíal azonos 'tulajdonságokat mutat. Papírkramatográfiás . (oldószer: 4:1:1 arányú foutanol :ecetsav :víz elegy), és vékonyrétegkromaitcigcáfiás (oldószer: '6:1:3:1 arányú propa-60 nol:víz:25%-os vizes ammónia elegye) vizsgálatok .alapján az anyag nem különbözik a Dauinasamintói. A termék papíron nirmidrin-reagenssel és anilinftalátokkal, vékony rétegeken pedig anizaldehiddel és kénsawal mutatható 65 ki. 12
