157600. lajstromszámú szabadalom • Eljárás grizeofaginok előállítására
157600 11 12 4. példa: 10 liter 140 fig/mí antibiotikum tartalmú erjesztéses oldatot 3,5 pH-n szűrtünk. A szűrt erjesztéses oldatból pH 6-on az antibiotikum-komplexet 100 ml Amberlite IRC 50 (H*) gyantán megkötöttük, majd a gyantát vizes és metanolios mosás után 300 ml 0,1 n HCl-lel eluáltuk. Az egyesített eluátumok pH-ját 7,8— 8,2-re állítottuk be, és a komplexet 100 ml etilacetáttal kivontuk. Az etilaeetátos kivonatot nátriumszulífátan szárítottuk, csökkentett nyomáson bepároltuk, majd a maradékból 2 ml petroléterrel kicsaptuk a hatóanyagot. Kitermelés 1,1 g (78%). 5. példa: A 3. példában leírt úton előállított, ill. tisztított komplex 3,0 g-jának benzoics oldatát 300 g semleges alumíniurnoxid-oszlopra vittük fel, majd benzollal kifejlesztettük az oszlopot 260 db 10 ml-es frakciót vettünk le. Az egyes komponenseket mint egységes anyagokat a 10. és 15. közötti; a 170. és 185. közötti, ill. ia 220. és 225. közötti frakciókból nyertük betöményítés, majd n-hexánnal való kicsapás után. Az oszlopról először az A komponenst, majd a B, ill. C komponenst kaptuk, utóbbi kettőt kloroform-metanol 9:1 arányú elegyével eluáltuk. A kapott egységes termékek súly szerinti megoszlása a következő: 10 mg A komponens 600 mg B komponens 300 mg C komponens 500 mg keverék anyag (B és C komponens). A termelési hozam a felvitt kiindulási anyagra vonatkoztatva kb. 50%-6. példa: A 4. példa alapján előállított komplex 1,0 gját feloldottuk 25 ml etilacetátban, majd 25 ml pH 6,3 foszfátpufferrel kiráztuk. A B komponens a vizes fázisba ment át, melyből pH 7,8— 8,4-n ismét etilacetátba vittük. Az így kapott etilaoetátas kivonatot 'nátriumszulfáton szárítottuk, majd be tömény ítettük és n-hexánnal kicsaptuk, így 320 mg egységes B komponenst kaptunk. A A, ill. C komponens 6,3 pH-n a szerves fázisban marad. A továbbiakban az A és C anyagokat tartalmazó etilacetátot 20 ml pH 5,6-os foszfátpufferrel ráztuk ki, ekkor az A komponens ment át a vizes fázisba, melyből a fenti úton nyertük ki. 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Az így kapott egységes A anyag 70 mg volt. A visszamaradt etilacetát kevés A komponenssel szennyezett, 260 mg súlyú C komponenst tartalmaz. Ennek szétválasztását a 7. példa szerint végeztük. A bevitt kiindulási összhozarn 65%. 10 7. példa: anyagra vonatkoztatva 1,2 g a 3. példa alapján tisztított komplexet szilikagél-oszlopon megoszlásos kromatográfiával komponenseire bontottuk pH 6,7 foszfátpuffer-etilacetát rendszerben. Az oszlop készítéséhez 80 g Kieselgel-G-t használtunk, 300 frakciót vettünk le. Először 220 mg Okömponenst kaptunk egységes tiszta állapotban. Az A és B komponenst pH 6,7 pufferrel telített butanollal eluáltuk. Az egyes frakciók feldolgozása után 250 mg egységes B komponenst, valamint 400 mg A és B keveréket kaptunk. Kitermelés 72%. Az A és B komponensek keverékének további szétválasztását a 6. példa szerint végeztük. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás grizeof áginak előállítására, azzal jellemezve, hogy a Streptomyces griseus var. griseoíagini törzset (az Országos Közegészségügyi Intézetnél letétbe helyezve 46 szám alatt 1968. július 1-én) komplex fehérjét, szénhidrátot és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, aerob körülmények között fermentáljuk, mäjd a tenyészetből a felhalmozódott girizeofaginokat extrakciós vagy kromatográfiás módszerrel elkülönítjük, illetve adott esetben egymástól elválasztjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy fehérjeként szójalisztet, mogyoróliisztet, kazein hidrolizátumot, kukoricalekvárt, szénhidrátként glükózt, Luktózt vagy keményítőt, szervetlen sóként CaCO-i-t (NH4 ) 2 S0 4 -t, NaCl-t alkalmazunk. 3. Az 1—2. igénypont szerinti eljárás foganatosítása módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 24—32 C°-on, célszerűen 26—30 C°-on folytatjuk le, és a fermentlevet 0,5'—1,5 l/l/perc, célszerűen 0,8—1,2 1/1/perc sebességgel levegőztetjük. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezye, pH = 4—9 között, célszerűen pH 7—8 között, hogy az erjiesztéses oldatából a gmizeofiaginokat valamely vízzel nem elegyedő poláris, szerves oldószerrel extraháljuk vagy kationcserélő gyantán kötjük meg. 3 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7008079. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 6
