157483. lajstromszámú szabadalom • Eljárás urikáz előállítására

21 157483 22 Ugyancsak lehetséges használatra kész 200— 500 e/mg liiterű nagymértékben tisztított urikáz-taífcalm'ú vizes oldat alkalmazása is megfelelően 'alacsony hőmérséklet megtartása mellett. Az oldatokat a nagymértékben tisztított urikázt és ammónium ionokat 0,1 M koncentrációban tartalmazó ammómumlkairbo'nátos vizes oldatban lehet előállítani, melynek során az oldat pH-ját széndioxid segítségével 8-ra állítjuk be. Az oldatot, amely példaképpen 1000 ml mennyiségre 200 000 egység urikázt tartalmaz, szűréssel sterilizáljuk és steril körülmények között 5 ml-es ampullákba töltjük. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás mikrobiológiai eredetű új urikáz előállítására és tisztítására, azzal jellemezve, hogy baktériumok, — elsősorban Bacillus nembeliek — gombák, — így élesztők, mint a Geotrichum és egyéb gombák, mint Mucor, Rhizopus, Absidia, Fusarium, Alternaria, PenicilMum, Aspergillus és Microsporium nembeliek — termelő törzséiből kiindullva, a termelő mikroorganizmust 20 és 35 C° közötti hőmérsékleten, nem spórás vagy kevésbé spórás mikroorganizmus esetén, megfelelően kevertetett és levegőztetett folyékony táptalajon süllyesztett előtenyésztés útján 4-12 napig spóráik esetén szilárd táptalajon 6-15 napig tenyésztjük, az így készített oltóanyaggal uráít-ionokat, szén-és nitrogéntartalmú anyagokat, különböző fémes és nem fémes elemeket és indukátort tartalmazó táptalajt oltunk be, a fermentációt 25-35 C° hömérsékMen végezzük, a keletkezett micéliumot a folyékony fázistól a termelés maximumának idején elkülönítjük, a micéliumot alacsony hőmérsékleten megfagyasztjuk, porítjuk, az urikázt 7-10 pH-n és 30 C° alatti hőmérsékleten extraháljuk majd besűrítjük, és a kapott nyers terméket tisztítjuk, miközben vízben feloldjuk, szerves oldószerekkel, vagy ásványi sókkal telített vizes oldattal kicsapjuk, a csapadékot centrifugáíás útján elkülönítjük, vagy — kívánt esetben — további tisztítás végett nagyfelületű anyagon megkötjük, vagy perfcoláljuk és — adott esetben — kr omatograf ál j uk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganato' sítási módja, jellemezve, hogy a mikroorganizmust a Streptomyceis cellulosae, Streptomyces sulfureus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Aspergillus flavus, Aspergillus oryzae, Aspergillus tamarii, Asp. terricola, Asp. luchuensis, Asp. niger, Asp. sydowi, Asp. niduians, Asp. wentii, Asp. fonseoaeus, Asp. cliavatus, Asp. ustus, Asp. terreus, Asp. ochraceus, Penicillium frequentans, Pen. granulátum, Pen. griseum, Pen, canescens, Pen. spinülosum, Pen. thomii, Pen. waksmami, Pen. tríaistrtiiclkii, Pen. expansum, Pen. purpurescens, Pen. funiculosum, Pen. spiculisporum, Pen. velutinuim, Pan. purpurtogenum, Pen. lilacinum, Pen. rubrum, Cephalosporiurn, Alternaria tenuis, Fusarium solani, Fus. moniliforme, Fus. coeruleum, Fus. oxysporum, Fus. orthoceras, Stemphylium macrosporoideum, Macrosporium apiospermum, Absidia glauca, Mucor mucedo, Mucor hiemalis, Mucor racemosus, Rhizopus arrhizus, Basidiomycetae és Goetrichum candidum által alkotott csoportból választjuk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a táptalaj 1 és 10 súly% közötti koncentrációban szénforrást, főleg egy vagy több egyszerű cukrot, mint glukózt vagy szacharózt, 1 és 10 súly% közötti koncentrációban nitrogénforrást, főleg ásványi nitrogént, mint ammóniumkloridot, ammóniumszulfátot, alkálinitrátokat vagy ezek keverékét, továbbá O,00íl és 0,5 súly%-ibain ásványi anyagokat, mint foszfort, magnéziumot, káliumot, nátriumot, kalciumot és vasat, induktoronként 0,01 és 0,2% a tenyésztés kezdetén, vagy pedig annak folyamán adagolt húgysavat tartalmaz. 4. A megelőző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a tenyészethez oligodinamikus anyagokat, mint aminosavaikat, vitaminokat, növekedést elősegítő szereket, nukleinsavakat és 0,001 és 0,5 %-ban fém nyomelemeket, mint mangánt, molibdént, kobaltot, cinket és rezet adagolunk. 5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt. — a táptalaj körülményeitől függően — addig, célszerűen 15—60 órán keresztül, folytatjuk, amíg az enzimaktivitás a tartós aktivitás optimumát eléri, azaz 60—90 perc alatt 10 %-nái többet nem változik. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a micéliumot alacsony, előnyösen —15 és —30 C° közötti hőmérsékleten megfagyasztjuk,'majd porítjuk. 7. A 6. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, bogy a fagyasztott és porított micéliumot pufferanyagtartalmú vagy ammóniás vízzel újra felvesszük, pH-ját 7 és 10 közé, előnyösen 8,5-re állítjuk be és 30 C° alatti hőmérsékleten extraháljuk. 8. Az előző igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a micélium-extiráktumdt derítéssel tisztítjuk. 9. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a micéliumnak a folyékony fázisból való elkülönítése és derítés útján történő, tisztítás után a micéliumkivonathóz antibiotikumot, előnyösen kloramfenifcolt vagy antiszeptikus anyagot, pl. nátriumiazidot adunk 10—500 /tg/ml, általában lOOjMg/ml mennyisiégben. 10. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az extraktumot 40 C° alatti hőmérsékleten csökkentett nyomáson sűrítjük be. 11. Az előző igénypontok bármelyike szerinti 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 13