157463. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tiszta humán albumin előállítására hemopigmenteket tartalmazó oldatokból
3 157463 4 súly% nátriumeitrátot és 0,4—1,2 súly% ammóniumszulfátot használunk. Előnyösen az albuminifrakcióra számítva 0,7% nátriumkloridot, 0,8% nátriuméi tretet és 0,4% ammóniumszulfátot használunk. A megadott pH érték beállítása után célszerű a kapott keveréket —7 és —20 C° közötti hőmérsékletre hűteni. A találmány szerinti eljárást az . alábbiak szerint hajtjuk végre. . Kiindulási anyagként retroplaicentáris plazmát, placenta extraktumot, hemolizált vérplazmát vagy más 'kiindulási anyagot használunk. A kiindulási anyagot egy tetszőleges ismert eljárással frakcionáljuk az albuminfrakeió elkülönítéséig, mely még globulinokat és hemopigmenteket tartalmaz. Az elválasztott frakciót megtisztítjuk a frakcionálás során felhasznált reagenséktől, azután desztillált vízzel 4% fehérjekoncentrációig hígítjuk. Az oldathoz 0,5—1 súly%, előnyösen 0,7 súly% nátriumklaridot, 0;4_i,4 súly%, előnyösen 0,8 súly0/ 0 nátriumeitrátot és 0,4—1,2 súly%, előnyösen 0,4 súly% ammóniumszulfátot adunk. Az oldat ionerőssége összesen 0,2—0,6. Az ammóniumszulfát hozzáadásával jobban oldatban tartjuk az albumint és megakadályozzuk a lipoproteidek oldódását. A nátriumcitráttal az a- és '^-globulin és hemopigmentek kicsapódását segítjük elő. A kapott keveréket 0 "C°-ra hűtjük, és annyi 95%-os etanolt adunk hozzá, hogy az elegy 30—50' ténf ogat% alkoholt tartalmazzon. Az alkoholadagolás köziben a hőmérsékletet 0 C-ról —6 C°nra csökkentjük, a pH-t 6,0— 6; 8-re állítjuk he, majd a csapadék alakjában kivált hemopigmenteket és globulinokat centriíugálással elválasztjuk. A csapadék elválasztása után az oldatot —6 és —20 C° közötti hőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk. Ekkor a maradék hamqpigment kiválik az oldatból. A csapadék fölött levő folyadék tartalmazza a tiszta alibumint, melyet kicsapunk és-liofilizálurik. Az albumin összkitenmelés mintegy 70%. A találmány szerinti eljárás lehetővé teszi, hogy gyógyászati célokra alkalmas tiszta albumint állítsunk elő olyan fehérje oldatokból, melyek bármilyen mennyiségiben tartalmaznak hemcipigmenteket. Az albumin tisztasága elektroforézis alapján legalább 97%. A találmányt az alábbi példák teszik szemléletessé. 1. példa: i Hemapigmentéket tartalmazó retroplacentáris szérumot használunk. Az oldathoz annyi telített ammóniuimszulfát oldatot adunk, hogy az ammóniumszulfát koncentrációja az oldatban 25% legyen. 6b Szűrés után a szűrletban az ammóniumszulfát koncentrációját telített ammóniumszulfát oldattal 45%-ra állítjuk be. A csapadékot a-glöbulin készítésére használjuk fel. A csapadék elvá-5 lasztása után az oldat ammóniumszultfát-tartalmát 75%-ra növeljük és a csapadékot kiszűrjük. Az alibumint tartalmazó csapadékot dializáljuk és desztillált vízzel addig hígítjuk, míg fehérjetartalma 4% lesz. Ez az oldat .elektro-10 forézis alapján 65% albumint, 25% a- és ß-gldbulint és 10% hemopigmentet tartalmaz. A kapott oldat 10 literéhez 70 g nátriumkloridot, 40 g ammániumszulfátot és 80 g nátriumeitrátot adunk. Az oldat ionerőssége összesen 15 0,37. A kapott keveréket 1 órán át alaposan keverjük és 0 C°-ra hűtjük le. Állandó keverés köziben 7100 ml -^20 C°-ra hűtött 95%-os etanolt adunk a keverékhez, így annak etanoltártalma 40% lesz. Az etanol hozzáadásával a 20 keverék hőmérsékletét 0 C°-íról —6 C°-ra csökkentjük, a pH-t 2n sósavval 6,4-re állítjuk be (a pH értékét vizes-alkoholos oldatban —6 C° hőmérsékleten imérve). A kivált csapadékot centriifugálással választjuk el. A csapadék el-25 választása után az oldatot —12 C° hőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk. Ekkor kicsapódik a még oldatban maradt hemopigment--mennyiség. A kitisztult oldatot dekantáljuk. A csapadék fölötti folyadék, mely a hemc-30 pigmentektől meg van tisztítva, 1,4% tiszta alibumint tartalmaz. A kapott albumin kiesaipása végett a pH-t 2n sósavval' 4,8-re csökkentjük. Az albumin csapadékot 5 térfogatrész apirogén desztillált vízben szuszpandáljuk, dialízissel sómentesítjük. megfagyasztjuk és liofilizálva szárítjuk. A száraz albuminiból ' desztillált vízzel 5— 25%-os oldatot készítünk, stabilizátorokat — 0,4% nátriumkaprilátot és acetiltriptofánt — adunk hozziá és 60 C°-os vízfürdőn 10 órán át pasztőrözzük. Az oldatot azután szűréssel sterilizáljuk és flakonokba töltjük. 2. példa: Kiindulási anyagként retroplacentáris szérumot használunk és az 1.'példában leírt módon végezzük el a firafccionálást. A kapott albumin diálizátum 10 literéhez, mely - 4% fehérjét (65% albumin, 25% a- és /?-globulin, 10% hemopigment) tartalmaz, 200 g nátriumkloridot adunk. Az oldat ionerőssége 0,3. Az oldatot 0 C°-ra hűtjük és —20 C°-ra hűtött" 95%HOS etanolt adunk hozzá, míg az oldat etanoltartalma 40% lesz. Az etanol hozzáadásával az oldat hőmérsékletét 0 C°-'tól —6 C°-ra csökkentjük. A pH-t 6,5nre állítjuk be. (Vizes-alkoholos oldatban —6 C° hőmérsékleten mérve.) A kivált csapadékot centrifugálással választjuk el. Az oldat 1,5% fehérjét tartalmaz, mely 92% albuminból és 8% a- és ß-2
