157298. lajstromszámú szabadalom • Eljárás NAD-kináz enzimkészítmény előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY 157298 jfek Nemzetközi osztályozás: C 12 c, k w Bejelentés napja: 1968. VIII. 08. (MA—2012) w .• V'" '''' ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1969. X. 22. Megjelent: 1970. IX. 30. Feltalálók: Polgár László biokémikus, 40%, Südi János biokémikus, 40%, Jécsai György biokémikus, 20%, Budapest Tulajdonos: MTA Biokémiai Intézete, Budapest Eljárás NAD-feináz enzimkészítmény előállítására A találmány tárgya eljárás NAD-kináz enzimkészítmény előállítására extraíkció útján. Ismeretes, hogy a nikotinamid-adenin-dmukleotidfoszfát (NADP) áz élő szervezetekiben 8 végbemenő oxido-redukciós folyamatokban résztvevő koenzim, amely a szervezetben nikotinamidHadenin-dinukleotidból (NAD) és adenozintrifoszfátból. (ATP) képződik. Ezt a reakciót a NAD-kináz enzim katalizálja olyan mó- io don, hogy az ATP egyik foszfátcsoportját átviszi a NAD-ra, miközben NADP és adenozin-difoszfát (ADP) keletkezik. Ezt az enzimet mostanáig galambmájból állították elő olyan módon, hogy a májat aceton^ 15 nal homogenizálták, és a kiszárított, ún. acetonszáraz porból vonták ki az enzimet, amelyet részleges megtisztítás után használtak fel NADP előállítására [Wang és munkatársai, J. Biol. Chem. 211, 466 (1954)]. 20 E módszer hátránya, hogy a galambmáj csak korlátozott mennyiségiben szerezhető be, és ezért ipari gyártásra nem alkalmas. Egy kg NADP gyártásához szükséges enzim 5000—6000 galambmáj felhasználásával állítiható elő. A 25 módszer további hátránya, hogy az aeetonszáraz májipor készítése rendkívül kényes folyamat, mert az aceton könnyen denaturálja magát az . előállítandó enzimet is [Kaplan és Iipmann, J. Biol. Chem. 174, 37 (1948)]. Különösen a 30 nagyobb méretben végzett előállítás vezet gyakran csekély aktivitású, sőt inaktív acetonszáraz porhoz. Végül az ismert módszer hátránya, hogy az így előállított enzim szennyezésként dinukleotid-(bontó enzimet, feltehetően pirofoszfatázt tartalmaz, ami rossz NAD •—-->• NADP konverziót eredményez. Az enzim pirofoszfatáz-szennyezése az inkubáció során képződött NADP részleges elbomlását is ereményezi. A találmány célja olyan eljárás biztosítása, amely egyszerű és olcsó módon teszi lehetővé NAD-lkináz enzimkészítmény előállítását. A találmány további célja olyan enzimkészítmény előállítása, amely jobb konverzióval eredményezi NADP előállítását NAD-ból. A találmány alapja az a felismerés, hogy ha galambmáj helyett csirkemájat használunk kiindulási anyagként, speciális extrahálási eljárással a NAD-kináz aktivitás NADP-bontó enzimszennyezéstől mentesen nyerhető ki. A találmány további alapja az a felismerés, hogy csirikemájból vízzel vagy vizes oldattal extrahálni lehet a NAD-kináz enzimet. Ez a felismerés azért meglepő, mert a vizes extraktumban az enzim jelenléte zavaró szennyezések miatt nem mutatható ki, és szakmai körökben az a nézet uralkodott, hogy az enzim 157298