157108. lajstromszámú szabadalom • Eljárás celluláz- és hemicelluláz-aktivítású enzimkomplex kinyerésére fermentációs anyagból
157108 8 mutatja —• a Pancellase készítményhez hasonlóan a nyers növényi szöveteket is bontani képes. Alkalmas az eljárás egyéb mikroorganizmusok és magasabbfendű gombák által tersééit celluláz kinyerésére is, sőt a kereskedelemben levő készítmények toyábbtisztítására is. II. táblázat 10 ml 0,1 mol acetát pufferben (pH 5) 200—200 mg nyers szeletek 10—10 E-nyi enzimmennyiséggel .inkubälva 16 órán át 37 C°-on. Szeletek súlya az inkubálás után _ „ n , Pan-Anyagok Cn e lulaz cellásé Kontroll °'1 TM g 2,5 mg ^lUüi} (10E) mg mg Kelkáposzta 190 140 176 Sárgarépa 182 150 174 Petrezselyem gyökér 192 180 170 Káposzta torzsa 196 170 190 Karalábé 192 110 180 Fekete retek 190 156 Burgonya 186 68 Babhéj 228 216 220 Borsóhéj 226 220 210 Az enzimaktivitás mérését viszkozimetriás módszerrel végezzük. Az enzim A mg, ill. ml mennyiségéhez 0,5%Tig karboxi-metilcellulózt vagy szalmából előállított xilo-galakto-arabán poliszaharidot adunk 0,05 mol acetát pufferben (pH 5). Öswald-féle viszkoziméterben 40 °C-on inkubáljuk. 1 egység (É) az az aktivitás, amely 20 ml 0,5%-os szubsztrát specifikus viszkozitását 40 °C-on 20 perc alatt a felére csökkenti. Ha A mg, ill. ml enzim mennyisége a szubsztrát viszkozitását T másodperc alatt a felére csökkenti, akkor a cellulolitikus enzimaktivitás 1 g-ra, ül. 1 literre vonatkoztatva: E = 20X 1 60 A X 103 Összehasonlításként néhány forgalomban levő cellulolitikus enzimkészítményt is mértünk az alkalmazott enzim tesztekkel; ezek valamenynyien alacsonyabb aktivitásúak voltak, mint a találmány szerinti eljárással Aspergillus speciesből előállított cellulolitikus enzim (Pancellase: 4 E/mg, Celluzym: 30 E/mg, Cellulase 36:2 E/mg). A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: 1. példa: 25 liter Aspergillus species 92 E/ml ceíTulolitikus aktivitású fermentlevet sósavval pH 5,5-re állítunk és 6% derítőföldet keverünk bele. Szobahőmérsékleten 1 órán át keverjük, közben az elegy pH-ja 3,7—3,8-ra csökken. Ezután az adszorbenst centrifugálással vagy szűréssel elkülönítjük; Az így összegyűjtött nedves anya-5 got szobahőmérsékleten (30 °C alatt) elszívás alkalmazásával megszárítjuk. Ä termék súlya 2,2 kg. Cellulolitikus aktivitása 0,5 E/mg. Termelés 48%. ^ 10 2. példa: ' 25 liter Aspergillus species szüretlen tenyészetéhez, amely 16,5 liter, 100 E/ml cellulolitikus aktivitású fermentlevet tartalmaz, a közeg vegyhatásának pH 5,5-re való állítása után 6,5% derítőföldet adunk enzimadszorbensként. A továbbiakban az 1. példa szerint járunk el. A száraz termék súlya 2,5 kg. Cellulolitikus aktivitása 0,3 E/mg. Termelés 45%. 15 20 25 35 40 45 50 55 60 65 3. példa: 25 liter pH 5,2-re állított Aspergillus species 100 E/ml cellulolitikus aktivitású, 7,3 mg/ml szárazanyag tartalmú fermentlébe 3,5% derítőföldet keverünk, A keverést 1 órán át szobahőmérsékleten folytatjuk, majd az adszorbenst elkülönítjük. Az így nyert szilárd anyagot 1,5 liter olyan eluálószerben szuszpendáljuk fel, amely mólos piridin és mólos nátriumacetátecetsav puffer (pH 5,9) 1 : 1 arányú keveréke és pH 6,5-t mutat. Ezután 15—-20 percen át keverést végzünk 0 °C — +5 °C-on. Az': oldatlan részt centrifugálással elkülönítjük, az enzimet tartalmazó oldatot pedig gyűjtjük. A leoldás műveletét még 2X1—1 liter eluálósisrrel megismételjük. Az egyesített eluátumokat a térfogatuk 3-szorosának megfelelő mennyiségű hideg acetonnal hozzuk össze keverés' mellett. A kicsapódó enzimet centrifugálással különítjük el és hideg acetonnal szárítjuk. AJermék súlya 13 g. Cellulolitikus aktivitása 100 E/mg. Termelés 52%. 4. példa: Mindenben a 3. példában leírt módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy az enzimet 10 liter 30 E/ml cellulolitikus aktivitású és 8,6 mg/ml szárazanyag tartalmú Aspergillus species fermentléből állítjuk elő. A termék súlya 3,85 g. Cellulolitikus aktivitása 23 E/mg. Termelés 29,5%. 5. példa: Mindenben a 3. példában leírt módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy az enzim megkötése 15 E/ml cellulolitikus aktivitású Penicillium species fermentléből történik, és a derítőföldből az enzim leoldását mólos nátriumacetát-ecetsav pufferrel (pl 5,9) végezzük el, Cellulolitikus aktivitás 18 E/mg. Termelés 20%, 4
