157010. lajstromszámú szabadalom • Eljárás albumin kinyerésére vérplazmából vagy vérszérumból

157010 4 E. Kallee és mtsai is csak olyan eljárást ismertetnek (Z. Naturforschung 12 B, 773 [1957]), amely teljesen alkalmatlan ipari méretekben való megvalósításra. Az emberi szérümfehérjék triklóreicetsavais frakcionálására Dirr és Färber által közölt módszer (Hoppe Seyler's Z. f. physiol. Chemie 313, 296 [1958]) viszont még analitikai méretben sem bizonyult megfelelőnek állati eredetű vérplazmák albuminjainak elkülönítésére. A találmány célja olyan eljárás kidolgozása, amely kiküszöböli az eddigi eljárások hátrányait és egyszerű, könnyen kivitelezhető módon teszi lehetővé az albumin gazdaságos kinyerését. A találmány alapja az a felismerés, hogy mono- és/vagy diklórecetsavval előkezelt vérplazmából vagy vérszérumból a helyettesített szerves savaik csoportjába tartozó fehérjekicsapószerrel kicsapott és elkülönített féhérje-keverékbol az albumin mono- és/vagy diklórecetsavat tartalmazó, apoláros és poláros szerves .oldószerből és vízből álló oldószereleggyel szelektíven kioldható, az így kapott oldatból izoelektromos pontján történő kicsapással egy lépésben izolálható. A találmány eljárás albumin kinyerésére vérplazmából vagy vérszérumból, amely abban áll, hogy a vérplazmához vagy vérszérumhoz monoés/vagy diklórecetsavat adunk, ennek jelenlétében a plazma-, ill. szérumfehérjéket a helyettesített szerves savak csoportjába tartozó fehérje kicsapószerrel kicsapjuk és elkülönítjük,« a vizet tartalmazó fehérjecsapadékból az albumint mono- és/vagy diklórecetsavat, továbbá apoláris és •poláris szerves oldószert tartalmazó -oldószereleggyel kioldjuk, majd az így nyert oldatból az albumint izoelektromos pontján kicsapjuk és elkülönítjük. A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint a vérplazma vagy vérszérum fehérjementesítését 0,05—1,0 mol/liter mono- és/vagy diklórecetsav jelenlétében 0— 40 C° közti hőmérsékleten, a helyettesített szerves savak csoportjába tartozó fehérje kicsapószerrel, pl. szulfoszalicilsavval vagy triklórecetsavval végezzük; a kapott fehérjecsapadékot elkülönítjük, s belőle az albumint 0,10—0,50 mól/liter mono- és/vagy diklórecetsavat, továbbá apoláris és poláris szerves oldószert és vizet 1— 10:75—90:19—5 arányban tartalmazó oldószereleggyel oldjuk ki. Apoláros oldószerként kloroformot, petrolétert, benzolt vagy benzint, poláros oldószerként pedig metil- vagy etilalkoholt vagy acetont használunk. Az oldószerelegyben oldhatatlan fehérjék elkülönítése után az albumint oldatából 0—25 C° közti hőmérsékleten izoelektromos pontján ammóniumhidroxiddal kicsapjuk és izoláljuk. A találmány szerinti eljárás értelmében célszerűen úgy járunk el, hogy 1 térfogat plazmához vagy szérumhoz szobahőmérsékleten 1/10 térfogat 10%-os mono és/ vagy diklórecetsavat adunk, majd a fehérjéket 1/2 térfogat 10%-os szulfoszalicilsavval vagy 1/2 térfogat 10%-os triklórecetsavval kicsapjuk és elkülönítjük; az oldat leöntése után a fehérjecsapadékot 2 tér-5 fogat olyan oldószereleggyel dörzsöljük szét, amelynek térfogatszázalékos összetétele 2 : 90 : : 8 = kloroform : etilalkohol : víz, s az oldószerelegy monoklórecetsavra nézve legalább 0,1 mol/liter töménységű. 10—30 perc időtartamú 10 keverés után az oldatlan fehérjéket elkülönítjük, az albumin oldatot derítjük, pH-ját 12%-os ammóniumhidroxid cseppenkénti hozzáadásával 5.0 és 6.0 közé állítjuk be, majd az ekkor kicsapódó albumint elkülönítjük és desztillált vízzel 15 szemben való dialízis után fagyasztott állapotból szárítjuk. A találmány szerinti eljárásnak az eddig ismert albumin kinyerési eljárásokkal szemben 2o előnye, hogy más plazmafehérjék kinyerésétől függetlenül, közvetlen úton teszi lehetővé az albumin előállítását, másfelől pedig egyszerű, ipari méretben is könnyen kivitelezhető és gazdaságos módszert nyújt nagytisztaságú albumin elő-25 állítására. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 30 50 55 1. példa 2 liter defibrinált marhavérből nyert szérumhoz szobahőmérsékleten előbb 200 ml 10%-os monokíórecetsavat, majd 20 percig tartó keverés után 1100 ml 10%-os szulfoszalicilsavat adunk 35 vékony sugárban, állandó keverés közben. A kicsapódó fehérjéket poharas centrifugán 1500— 2000 g-vel 10—15 percig ülepítjük, majd az oldatot elöntjük. A szérumfehérjéket tartalmazó csapadékból az albumint 4 liter olyan oldószer-40 eleggyel oldjuk ki, amelynek összetétele: 100 ml 40%-os monoklórecetsav, 160 ml deszt. víz, 40 ml kloroform és 3700 ml etilalkohol. Az oldást szobahőmérsékleten állandó keverés közben 30 percen át végezzük, ezt követően az oldatlan 45 maradékot centrifugálással elkülönítjük, majd eldobjuk. Az albumint tartalmazó oldatot szilikát alapanyagú diatomaföldön, Hyflo Supercelből készített szűrőpadon szűrjük. A savanyú pH-iú tiszta szűrlethez ezután állandó keverés közben cseppenként 12%-os ammóniumhidroxid-oldatot adunk s vele a pH-t 5.0 és 6.0 közé állítjuk be. Az ilyenkor kicsapódó albumin gyorsan az edény aljára ülepszik; az oldatot elöntjük, a csapadékot pedig rövid időtartamú centrifugálással ülepítjük, majd deszt. vízben oldjuk, dializáljuk, végül fagyasztott állapotból szárítjuk. Hozam: .10,4 g albumin/liter szérum, tisztasága elektroforetikus vizsgálat alapján 98%), hamutartalma 0,6%. A kiindulási plazmaalbuminra 60 vonatkoztatott kitermelés 30%. 2. példa 5 liter oxalates marha-plazmához 250 ml 65 40%-os monokíórecetsavat, majd állandó keve-2