156667. lajstromszámú szabadalom • Eljárás redukált nitkotinamid-adenin-dinukleotid-foszfát-tetranátriumsó előállítására
156667 zett többórás szárítás után is a maradék víztartalom mintegy 8,5%, Ennek a vízmennyiségnek a beszámításával a preparátumot az NADPH mintegy 90%-os tetranátriumsójának nevezhetjük. 1. példa: 4 g NADP-t G—6—PDH-val a szokásos módon redukálunk. (Colowick F. P. és Kaplan N. O.: Methods in Enzymology, I. kötet, ' Acad. Press, New York 11955, 323. o.) A reakciókeveréket vízzel 5000 ml-re hígítjuk, a pH-t kationcserélővel 7,8-ra állítjuk be. Ezután az oldatot egy mintegy 90 g DEAE-icellulózzal (szubsztitúciós fok 0,57 mval/g) töltött oszlopra visszük, melyet az anyag felvitele előtt etiléndiamin-ecetsav puff érrel (pH 7,6—7,8) állítottunk be. Az elúciót +4 C°-on, 0,005 metiléndiamm-ecetsav puffertoen pH = 7,6—7,8-on NaBr lineáris gradiensével végezzük. A keverőedényben 2,5 1 0,005 m etiléndiamin-ecetsav puffer van, a tárolóedényben ugyanolyan mennyiségű 0,6 m NaBr-tartalmú puffer. A tiszta NADPH-frakciókat — melyek az E340/E 26 o = 1 : 2,40 aránynyal rendelkeznek — összegyűjtjük, pH-ját 1 n NaOH-dal 10-re állítjuk be, vízsugárszivattyúval előállított vákuumban térfogatát mintegy 200 ,ml-re csök/kentjük ós liofilizáljulk. A száraz preparátumot +4 C°-on etanollal halogénmentesre mossuk, majd éterrel, és végül nagyvákuumban P2 0 5 felett szárítjuk. 3,36 g NADPH—sNa4 -ot kapunk, tisztasági fok 73% NADPH i(sza;bad sav) ill. 81% NADPH— —Na4. A termelési hányad a tiszta NADP-re vonatkoztatva mintegy 77%. 10 15 20 25 35 2. példa: 4 g NADP-t az 1. példa szerinti módon redukálunk, és egy mintegy 90 g DEAE-cellulózzal (szübsztitúciós fok 0,50 mval/g) töltött 'oszlopra visszük, amelyet az anyag felvitele előtt piridinecetsav pufferrel <pH = 7,4—7,5-re állítunk be. Az elúció -f-4 C°-on piridin-ecetsav pufferrel pH = 7,4—7,5 értéken bekövetkezik. A keverőedényben 2,5 1 0,005 m piridin-ecetsav' puffer van, a tárolóedényben ugyanolyan mennyiségű 0,6 m NaJ-tartalmú puffer. A további feldolgozás az 1. példában leírtak szerint. Az NADPH—. —Na4 tisztasági fdka 80,5%. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás redukált nikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfát-tetranátriumsó DEAE-cellulózon történő kromatográfiával és lineáris grádienselúcióval való előállítására, azzal jellemezve, hogy eluensként 8 pH alatti, előnyösen 7,6— 7,8 pH-jú illékony puffert és 0,4—0,7 m, előnyösen 0,6 m nátriumbromidot vagy nátriumjodidot alkalmazunk, és az elúciót 10 C° alatti, előnyösen 4 Cp hőmérsékleten végezzük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy illékony pufferként etiléndiamin-ecetsav rendszert alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy illékony pufferként piridin-ecetsav rendszert alkalmazunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7007217. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.
