156235. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
7 156235 8 1958] leírt módszerirel állíthatók elő. Eljárhatunk pl. oly módon, hogy glutaminsav-Tcc-Jsarbonsav-anhidrid-yJbenzilésztert vagy -tercier butilésztert dioxán jelenlétében amimóniával vagy valamely aminnal, a kívánt polimerizációs foktól függően megválasztott mólarányban (pl. 100 :1) reagáltattunk és a polimerizáció befejezte után a védőcsoportokat lehasítjuk. Ez a művelet pl. benziloxi-csoport esetében hidrogónhramiddal jégecetes közegben, tercier-butiloxi-csoport esetében trifluorecetsawal történhet. Egységes, definiált lánchosszúságú polimerek előállítása céljából a polimerek a peptidkómiában szokásos szintetikus módszerekkel (a karbodiiimid-módszer, azidmódszer stb.) is felépíthetők. A gyógyszerkészíitményekbein a polkner koncentrációja az illető só oldhatóságától és viszkozitásától függően választandó meg. A polimereknek a gyógyszerkészítményeikben oldott állapotban, még pedig injekció céljaira alkalmas oldat formájában kelle jelen lennie. Az adrenokortikotrop hatású peptid koncentrációját oly módon választjuk meg, hogy a gyógyszerkészítmény például 0,1—5 mg/ml hatóanyagot tartalmazzon. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli .módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. E példákban a hőmérsékleti adatok Celsius fokokban értendők. A számjelzésefckel megadott vékonyrétegű kromatográfiai rendszerek az alábbi összetétetelűk: 40 rendszer: n-butamol-eitanol-víz (40 : 40 : 20) 43 A rendszer: terc.-aimilalkohol-izopiropanol-víz (67 : 26 : 7) 45 rendszer: szek.ibutanol-3% ammónia (70 : 30) 52 rendszer: n-butanol-jégecet-víz (100 : 10 : 30) 52 A rendszer: n-butanol-jégecet-víz (67 : 10 : 23) 54 rendszer: szek.-butanol-izopropanol-9rt /oos vizes monoklórecetsav (58 : 8 : 34) 96 rendszer: szek.-butanol-jégecet-víz (67 : 10 : 23) 100 rendszer: etilacetát-piridin-jégecet-víz (62 : 21 : 6 : 11) 101 rendszer: n-butanol-piridin-jégeeet-víz (30 : 20 : 6 : 24) 101 E rendszer: n-ibutanol-piridin-jégecet-víz (42 : 24 : 2 : 30) 104 rendszer: kloroform-metanol-17%-os ammóniaoldat (41 : 41 : 18) 112 A rendszer: n-butanol-piridin-hangyasav-víz (42 : 24 : 4 : 20) 112 E rendszer: n-butanol-piridin4vangya8av-víz (44 : 24 : 2 : 20) A példákban a védőcsopoirtok megjelölésére az alábbi rövidítéseket alkalmaztuk: Z = karfooibenzoxi-csopart BOC = terc.-ibutiloxilkarbonil-csoport tBu = terc.-biutilcsoporit 5 1. példa: H-D-Ser-Tyr-Gly-Met-Glu-Hiß-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-GH (D-Ser^-Gly3 -10 -Lys17-18 -/í 1 ~ 24 ikortikotropiiri). 270 mg BOC-D-Ser-Tyr-Gly-Met-GluíOtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Piro-V!al-Gly-Lys(BOC-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Val-15 -Lys(BOC)-Pro-Val-Tyr-Pro-OtBu-t 13 ml 90%os trifhiorecetsavfoan feloldunk és 30 percig 22 C°-on állni hagyjuk. Az oldatot ezután kb. 2 ml térfogatra bepároljuk, 10 ml vízzel hígítjuk, ismét 3—4 ml térfogatra bepároljuk 20 és liofiüzáljuk. Az így kapott szabad tetrakozepeptid trifluoraoetátját acetáttá való átalakítás céljából 5 ml vízben feloldjuk és 15 mm átmérőjű és 15 mm hosszúságú acetát formájú gyengén bázisos ioncserélővel (Merk. 25 No. II) töltött oszlopon szűrjük. Az eluátumot néhány ml n-butanol hozzáadása után kb. 4 ml térfogatra bepároljuk és liofiüzáljuk. így 230 mg kromatográfiás és elektroforetikus vizsgálattal egységesnek bizonyuló D-Ser^Gly3-30 -Lys^^-^^-kortikotropin-acetátot nyerünk amorf vízben jól oldódó por formájában. A termék vékonyrétegű kromatografálás során alumíniumoxidon (DA) és cellulózon (DC) a következő R/-értékeket mutatja: 35 DA: R/ (101) =0,42 R/ (52A) =0,25 DC: R/ (112A) = 0,48 40 Papírelektroforetikus vizsgálatnál (piridinacetáttal pufferolt közegben, pH 6,1 értéken, 16 Volt (cm) a termék 2 óra leforgása alatt 8,6 cm utat vándorol a katód felé. A termék a /?1-24 -kortikotropinhoz képest 45 erősen fokozott és nyújtott kortikotrop hatást fejt ki. A kiindulóanyagként használt tetrakozapeptidszármazékot az alábbi módszerrel készítjük: 50 1. BOC-D-Ser-Tyr-Gly-Met-Glu.(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH. 5,7 g (10 mmól) 668 250 számú belga szabadalmi leírás szerinti eljárással készített BOC-55 -D-Ser-Tyr-Gly-Met-NH-NH2 -ot 50 ml dimetilformamidiban szuszpendálumk és —15°~on keverés közben 1,2 ml 2n etilacetátos sósavoldatot majd 1,13 g (11 mmól) terc.-butilnitritet adunk hozzá. A beadagolás után az elegyet —15°-on 6** még 10 percig keverésben tartjuk, majd a kapott BOC-tetrapeptidazid oldatához 3,5 ml (25 mmól) trietilamint adunk. Az így képezett oldatot. 7,1 g (8 mmól) H-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH 150 ml dimetilformaimidban 65 és 7,5 ml vízben képzett és —10°-ra lehűtött 4
