156139. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kandicidin előállítására mikrobiológiai úton

156139 Gyűrt, világos sárgásbarna szubszitrátmioélium. Oldódó pigment nincs. Keményítő-kazeiin^agar: Gyengén fejlett, porszerű, világosszürke légmicélium. Közepesen fejlett, világos vörösesbarna, lepelszerű szuhsztrátmiicélium. Halvány sárgásbarna, oldódó pigment. „,Nähr"-aga:r: Légmiicélium nincs. Szubsztrátmioélium alig fejlődött, gyenge, színtelen, lepelszerű. Oldódó pigment nincs. Szaccharóz-nitrát-agar: Légmicélium nincs. Igen gyengén fejlett, színtelen, lepelszerű szubszltrátmicéliüim. Oldódó pigment nincs. Szintetikus-agar: Közepesen fejlett, porszerű, világosszürke légmicélium. Közepesen fejlett, ráncos, világos sárgásbarna szubsztrátmicélium. Halványsárga, oldódó pigment. Tripton-élesztőkivonat-agar: Nagyon gyenge, szürkés, porszerű légmicélium. Igen gyengén fejlett, színtelen, lepelszerű szubsztrátmicélium. Oldódó pigment nincs. Élesztő.kiy©nat-maMtakivonat^agar: Fejlett, hamuszürke légmicélium, fejlett sárgásbarna, gyűrt szuibsztrátmicélium. Oldódó pigment nincs. Zabpehely-agar: Fejlett, porszerű, hamuszürke légmiicélium. Fejlett, barnásvörös, gyűrt szubsztrátmicélium. Vörösesbarna, oldódó pigment. Keményítő-agar: Fejlett, hamuszürke, porszerű légmioélium. Fejlett, gyűrt, barnásvörös szubsztrátmicélium. Oldódó pigment vagy nincs vagy pedig halvány vörösesbarna. MikromorflOilógia: A különböző típusú sporofórok százalékos megoszlása a táptalajok öszszetétele szerint bizonyos ingadozásokat mutat. így pl. zabpehely-^agáron rectus flexibilis 3—5%, retinaculum 25—30%, spiral 65—70%. Élesztőkivonat-malátakivonat-agaron rectus flexibilis 5%, retinaculum 25%, spirál 70%. A spirálok kanyarulatainak száma szélsőséges esetekben 2—8 között ingadozik; ez függ a táptalaj összetételétől, minthogy pl. élesztőkivonat-imalátakivonat^agaron a kanyarulatok száma átlag 3— 4. A spórák hengereseik, felületük az elektronmikroszkópos vizsgálatok szerint sima. Az S-502 törzs tenyészeteiben glöbuláris spoirangiumot, flagellált spórákat, sclerotikuniokat nem találtunk, és a szubsztrátmicélium szétesését sem figyeltük meg pálcika és coccusszerű sejtekre. Nitrát-redukció: A különböző időpontokban végzett megfigyelések nem vezettek egyöntetű eredményre. Az S-502 törzs kezdetben nem., később pozitív reakciót adott. (Megjegyezni érdemes, hogy amerikai szerzők közlése szerint a nitrát-redukció a sugá-rgomba-diagnosztikában használhatatlan bélyeg.) C-forrás értékesítési spektrum (— = növekedés és értékesítés nincs; ± = növekedés nyomokban; + = gyenge, -j—\- —-közepes és -|—|—\- = erőteljes fejlődés, illetve hasznosítás arabiinóz: -|—]—\-; glükóz: -)—\-; fruktóz: -|—|—\d-mannit: -\—|—\-; rafifinóz: —; ramnóz: -\—|—h szacharóz: —; xilóz: -\--\—)-; d-galaktóz: -\—1—\rnelibióz: -\—\-; inulin: —; dulcit: —; szalicin + ; d-szorbit: +; melecitóz: —; adonit: ± ; tre.hálóz: -|—|—f-; lafctóz: -|—|—\~; kontroll: —. Melanin^próiba: Pepton-élesztőkivonat-vas-agaron, valamint tirozin-agaron egyaránt negatív. A szubsztrátmicélium indikátor-karaktere: nem észlelhető. S Rendszertani helyzet: Miután az S-502 jelzésű törzset közvetlenül összehasonlítottuk egy sor, a rokonság szempontjából számításba vehető, autentikus Streptomyoes kultúrával, megáEapítottuk, hogy a Gauze és munkatársai által 10 leírt Actinomyces griseorubens, griseoruber és griseorubiginosus var. spiralis fajok típustenyészeteihez áll legközelebb. Ezek alapján a következőket állapíthatjuk meg: A griseoriUbiginosus var. spiralis elkülönül a 15 másik három törzstől erőteljes ehromogenitásávial. A C-foirrás értékesítő spektrum tekintetében az S-602 törzs csaknem telj'es megegyezést mutat az Actinomyces griseorufoeir törzzsel, míg a másik kettővel összehasonlítva néhány eltérés 20 mutatkozik. Mind a négy törzs azonos mikromorf ológiai viszonyokat mutat: a spirálisok szerkezete lényegében ugyanaz, a spórák elektronmakroszkópos alakja rendkívül hasonló, és az S-502, ül. az Actinomyces griseoruber törzsek 25 esetében már nem megkülönböztethető. A kulturális tulajdonságok egybevetésekor megállapítottuk, hogy mind a négy törzs szubsztrátmieéliumában a vörös endopigment megjelenése rendkívül labilis, és vagy csak bizonyos esetekben, 30 vagy egyáltalán nem mutatható ki. Az S-502 törzs esetében is tapasztaltuk a szubsztráitmicé-Bum vörös árnyalatának erős ingadozását. Kétségtelen, hogy az S^50i2 törzs az Actinomyces griseorubens és az Actinomyces griseoruber fa-35 jókkal szoros rendszertani egységet alkot, és megítélésünk szerint az Actinomyces griseo^ ruber egy változatának kell tekinteni. Actinomyces griseoruber törzzsel kapcsolatban mindeddig heptaén antibiotikum termelést nem ír-40 tak le. A találmány eljárás kandicidin előállítására mikrobiológiai úton, amely abban áll, hogy a termelést a szokásos előfermentáció közbeiktatása után Actinomyces griseoruber törzzsel (az 45 Országos Közegészségügyi Intézetnél letétbe helyezve 3í3 sz. alatt 1967. január 31-én) végezzük komplex fehérje, célszerűen amerikai mogyoróliszt és kukonicalekvár, szénhidrát, célszerűen keményítő vagy glükóz, továbbá szervetlen sók 50 jelenlétében, aerob fermientációs körülmények között, és a fermentáció befejeződése után a kandicidint szerves oldószeres extrakícióval elkülönítjük. A találmány szerinti eljárás egy előnyös fo-55 ganatosítási módja szerint a fermentációt zsírjellegű habzásgátló anyagok és/vagy foszforsavészterek, célszerűen triibutilfoszíát jelenlétében folytatjuk le. A fermentáció befejeződése után a kandici-60 dint acetonnal vagy kloroform és metanol elegyével végzett extrakcióval célszerű elkülöníteni. A kandicidin kinyerése a ferimentléből kiszűrt mioéliumról a szakirodalom szerint n-butanolos extrakcióval történik (2 992 162 sz. USA 6ö szabadalom). Tekintettel arra, hogy a kandicidin