155884. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergolintípusú vegyületek előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Pótszalbadalom a 151 785 számú törzsszabadalomhoz. Bejelentés napja: 1967. III. 08. (SA—1783) Svájci elsőbbsége: 1966. III. 10. Közzététel napja: 1968. IX. 25. Megjelent: 1069. X. 15. 155884 (. Viz%it * *. /»í c i í Í n i Szabadalmi osztály: 30 h 1—8 Nemzetközi osztály: A 61 k Decimái osztályozás: Feltalálók: Dr. Rutschrnann Jürg vegyész, Oberwil/BL, Dr. Kobe! Hans vegyész, Basel, Svájc Tulajdonos: SANDOZ A. G,

: Basel, Svájc Eljárás ergolin-típusú vegyületek előállítására 1 Az 151 785 sz. törzsszabadalomban eljárást ismertetünk az ergolin-típusú vegyületeknek a Claviceps paspali Stevens et Hall gombafej egyik új, in vitro konidiumokat képező törzsének alámerített, ill. fermentortenyészetben való 5 szaprofita tenyésztése útján való előállítására, majd az ergolin-típusú vegyületeknek a tenyészet szűrletéből önmagában ismert módon való extrakciójára. Ezt a gombatörzset az United States Department of Agriculture (Northern 10 Utilisation Research and Development Division), Peoria, Illinois NRRL 3027 deponálási szám alatt őrzi. Azt találtuk, hogy ebből a gombatörzsből röntgen- és/vagy ultraibolya besugárzás és/vagy ID etilénimines kezelés hatására önmagában isimert módon mutánsokat lehet előállítani, amelyek több ergolin-típusú vegyületet, főként lizergsav-, ill. izolizergsavamidot képesek termelni, mint a kiindulási törzs. Ezeknek a mutánsoknak 20 egyikét az United States Department of Agriculture (Northern Utilisation Research and Development Division), Peoria, Illinois őrzi NRRL 316(6 szám alatt. A mutánsok például a következőképpen állít- 25 hatók elő: Az NRRL 3027-es gombatörzs konidiumait vízben szuszpendáljuk, és úgy osztjuk el malátaagarral kiöntött Petri-csészékben, hogy minden Petri-csészébe kb. 1000 spóra jusson. Ezután az agarfelületet ultraibolya sugarakkal ;•£> besugározzuk, amíg csak 5—10 konidium csírázik ki Petri-csészónkónt; ez 99—09,5 %-os pusztulási aránynak felel meg. A sugárforrás távolságát és a megvilágítási időt az előkísérletekből empirikusan határozzuk meg. A túlélt spórákból 10—14 nap alatt 22 C°-on makroszkopikusan látható telepek keletkeznek. Ezeket szétválasztjuk, és tovább oltjuk, hogy a törzszaba-r dalomban leírt módon konádiuimos kultúrákat kapjunk. Az így nyert mutánsokból tenyésztési kísérletekkel (pl. törzsszabadalomban leírt kultúrák egyikével) kiválasztjuk azokat a törzseket, amelyek különösen nagy ergolin-típusú vegyület-képzési hajlammal tűnnék ki, és etilénimdnnel való további mutagen kezelésnek vetjük alá. Ekkor a konidiumokat 24 C°-on, 2 órán át l%o-es etilénimin oldatban szuszpendáljuk, a spórákat membránszűrővel elválasztjuk az oldatból, a szűrőn steril vízzel mossuk, majd agar lemezekre oltjuk. Ennél a kezelésnél a pusztulási arány kb. 99%. A túlélt törzsekből a fentebb leírt módon ismét kiválasztjuk a legtöbb ergolin-típusú vegyület képzésére hajlamos mutánsokat, és ezeket még 5—10-szer etilénimines mutagen kezelésnek vetjük alá. Így pl. e kezelés 8. ismétlésénél különösen nagy termelőképességű törzset nyerünk, amelynek az United States Department of Agriculture (Northern Utilisation Research 155884