155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
19 védett pentapeptidamidot kapunk, mely a fentivel azonos minőségű. 5. lépés H-Lys(BOC)-Lys(BO'C)-Arg-,Arg-Pro— —NH2 -.3 HC1 0,5 g védett pentapeptidamidot 45 ml jégecetben hidrogenolizálunk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk kloroformban és 0,3 g piridin-klórhidrátot adunk hozzá, majd éterrel kicsapjuk. A csapadékot feloldjuk 0,5 ml kloroform-metanol (60:38) elegyben és szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk kloroíorm-metanol-víz (60:38:10) eleggyel. A főterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és éterrel eldörzsöljük. 0,4 g (89%) pentapeptid-triklórhidrátot kapunk. Rf2 0,5—0,6. 6. lépés BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-GluíOBuO-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro—NH2 197 mg védett teíradekapeptid-klórhidrátot (1. példa 10. lépés), 149 mg pentapeptid-triklórhidrátot, '56 mg pentaklórfenolt és 45 mg diciklohexilkarbodiimidet feloldunk 0,5 ml dimetilformamidban, mely 15 mg trietilamint is tartalmaz. A reakcióelegyet két napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd peroxidmentes éterrel hígítjuk, a kivált csapadékot szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk etilacetát-piridin-hangyasav-víz (40:20:6:5,5) eleggyel. A tisztítás végén 144 mg (50%) védett nonadekapeptidamidot kapunk. Rf5 0,20—0,26. 7. lépés H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro—<NH2 100 mg védett nonadekapeptidamid védőcsoportjait az 1. példa 11. lépésében megadott módon távolítjuk el. 60 mg {kb. 70%) nonadekapeptidamidot kapunk. Rf« 0,30^0,40. 8. példa: 1. lépés Z-Lys(BOC)-Lys(BO€)-Arg(N02 )-Arg(N0 2 )-Pro-Val—JMH2 584,8 mg védett pentapeptid-pentaklórfenilésztert (7. példa 3. lépés b) pont) és 0.15 g valinamidot feloldunk 1,0 ml dimetilformamidban és két napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegy bepárlása után az olajos maradékot szilikagélből készített oszlopon tisz-20 ttíjuk etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:10:3:5,5) eleggyel. 320 mg tiszta védett hexapeptidamidot nyerünk. Rf2 O,4—-0,5. 5 Hasonló módon 500 mg védett pentapeptid-p-nitrofenilészter (7. példa 3. lépés a) pont) és 80 mg valinamid-klórhidrát, valamint 50 mg trietilamin reakciójával is előállíthatjuk a védett hexapeptidamidot. Kromatografálás után 10 430 mg (88%) végterméket kapunk. Rf2 0,4— 0,5. 2. lépés 15 H-Lys(BOC)-Lys(BOC)^Arg-Ai-g-Pro-Val— —NH2 -3 HC1 '0,2 g védett hexapeptidamidot 10 ml jégecet-20 ben hidrogenolizálunk csontszenes palládium jelenlétében, majd a reakció végén a katalizátor kiszűrése után a jégecetes oldatot bepároljuk. A maradékot kloroformban oldjuk, 0,12 g piridin-klórhidrátot adunk hozzá és éterrel kicsap-25 juk az anyagot. A csapadékot 0,1 ml kloroform-metanol (60:38) elegyben oldjuk és szilikagélből készített oszlopon kloroform-metanol-víz (60:38:10) eleggyel kromatografáljuk. Végül 0,17 g hexapeptid-triklórhidrátot kapunk (100%). 30 Rf3 0,42—0,50. 3. lépés 35 BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OBuO-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val—NH2 40 197 mg védett tetradekapeptid-klőrhidrátot (1. .példa 10. lépés), 12,8 mg hexapeptid-triklórhidrátot, 56 mg pentaklórfenolt és 45 mg diciklohexilkarbodiimidet feloldunk 0,5 ml dimetilformamidban, mely 11,7 mg trietilamint is tar-45 talmaz. Két nap után a reakcióelegyet peroxidmentes éterrel hígítjuk, a csapadékot szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk etilacetát-piridin-hangyasav-víz (40:20:6:5,5) elegygyel. A főterméket tisztán tartalmazó frakció-50 kat összegyűjtjük, bepároljuk és etilacetáttal eldörzsöljük. 185 mg (61%) védett ikozapeptidamidot nyerünk. Rf5 0,27—^0,34. 55 4. lépés H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-60 -Pro-Val—NH2 100 mg védett ikozapeptidamid védőcsoportjait az 1. példa 11. lépése szerint távolítjuk el. 75 mg (87%) ikozapeptidamidot kapunk. Rf6 65 0,22—0,25. 10
