155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
155880 15 desztilláljuk, a maradékot oldjuk etilacetátban (200 ml) és 0 C° hőmérsékleten mossuk 1 n sósa voldattal, vízzel, szárítjuk és bepároljuk. A védett tripeptidészter kristályosan marad viszsza, melyet etilacetáttal felszuszpendálva szűrünk és szárítunk. 3,1 g (77%) anyagot kapunk. Op.: 92—94 C°. Rf2 0,80—^0,88. 3. lépés H-Lys(BÓC)-(Lys(BOC)^Arg—NH2 • 2 HC1 1,5 g védett tripeptidamidot 75 ml ecetsavban hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük és az oldatot bepároljuk. A párlási maradékot oldjuk kloroformban és 1,0 g piridin-klórhidrátot adunk hozzá, majd az anyagot éterrel kicsapjuk, éterrel eldörzsöljük és 1 ml kloroform-metanol (60:38) elegyben ismét feloldjuk, végül szilikagélből készített oszlopra visszük. A kromatografálást kloroform-metanol-víz (60:38:10) elegyben végezzük. A főterméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk és éterrel eldörzsöljük. 1,0 g (77%) tripeptidamiddiklórhidrátot kapunk. Rf3 0,70—'0,80. (A hidrogenolízis során keletkező ammónium-acetátot ammónium-kloriddá alakítottuk; ez kisebb Rf értékkel vándorol, a kromatografálás során lemarad). 4. lépés BOC-Ser-Tyr^Ser-Met-Glu(OBu')-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BQC)-Arg—<NH2 ,197 mg védett tetradekapeptid-klórhidrátot (1. példa, 10. lépés), 100 mg tripeptidamid-diklórhidrátot, 53 mg pentaklórfenolt és 46 mg diciklohexilkarbodiimidet feloldunk 0.5 ml dimetilformamidban, mely 14 mg trietilamint is tartalmaz. A kapott reakcióelegyet két napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd éterrel hígítjuk és a kivált nyers reakcióterméket szilikagélből készített oszlopon kromatograf áljuk etilacetát-piridin-hangyasav-víz (40:20: :6:5,5) elegyben. A főterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és etilacetáttal eldörzsöljük. 149 mg (58%) védett heptadekapeptidamidot kapunk. Rfs 0,38—0,43, Rf7 0,08— 0,13. 5. lépés H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg—NH, 100 mg védett heptadekapeptidamid védőcsoportjait az 1. példa 11. lépése szerint távolítjuk el. 70 mg (kb. 75%) heptadekapeptidamidot nyerünk. Rf« 0,30—0,35. 10 15 6. példa: 1. lépés Z-Lys(BOe)-Lys(BOC)-Arg(NO,)-Arg(NO.,)— —NH2 1,85 g Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-N2 H 3 dipeptidhidrazid'ból az 5. példa 2, lépés a. pontja szerint kloroformos azid-oldatot készítünk és ezt az alábbi oldathoz öntjük: 1,8 g H-Arg(N02 )-Arg(N02 )—NH 2 • HBr dipeptidszármazékot [H. Otsuka, K. Inouye, M. Kanayama és E. Shinozaki: Bull. Chem. Soc. Japán 38, 1563 (1965)] és 0,6 ml trietilamint feloldunk 8,0 ml dimetilformamidban. A reakcióelegyet két napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd bepároljuk és szilikagélből készített oszlopra visszük, etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:10:3:5,5) eleggyel 2u kromatografáljuk. A főterméket tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és bepároljuk, éterrel eldörzsöljük. 2,05 g (68%) védett tetrapeptidamidot kapunk. Rf2 0,38—0.48. 25 2. lépés H-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-A.rg—NH2 • 3 HC1 0,4 g tetrapeptidamidot 10,0 ml ecetsavban 30 hidrogenolizálunk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük és az oldatot bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk kloroformban és 0.3 g piridin-klórhidrátot adunk hozzá, majd az anyagot 55 éterrel kicsapjuk. A csapadékot feloldjuk 0,5 ml kloroform-metanol (60 : 38) elegyben és szilikagélből készített oszlopra visszük, kloroform-metanol-víz (60 : 38 : 10) eleggyel kromatografáljuk. A főterméket tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és éterrel eldörzsöljük. 0,3 g (86%) tefcrapeptidamid-triklórhidrátot kapunk. Rf3 0,55—0.65. 40 45 50 55 60 65 3. lépés BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu (OBu 0-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pi-o-Val-Glv-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg—NH2 103,5 mg védett tetradekapeptid-klórhidrátot (1. példa, 10. lépés), 65 mg szabad tetrapeptidamid-triklórhidrátot, 2.6 mg pentaklórfenolt .és 21 mg diciklohexilkarbodiimidet feloldunk 0,3 ml dimetilformamidban. mely 7.2 mg trietilamint is tartalmaz. A reakcióelegyet állni hagyjuk szobahőmérsékleten két naixm át, majd peroxidmentes éterrel hígítjuk, a'kivált nyers reakcióterméket szilikagélből készült oszlopon kromatografáljuk etilacetát--oiridin-hangyasav- . -víz (40 : 20 : 6 : 5,5) eleggyel. A főterméket tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és bepároljuk, etilacetáttal eldörzsöljük. 73 mg , (51%) védett oktadekapeptidamidot kapunk.-Rí ,; 0,17—0,23. '• - "***
