155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
9 155880 10 3. lépés ZJArg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly— —OH-HC1 9,9 g védett heptapeptidészter-klórhidrátot feloldunk metanolban és 18 ml 1 n nátriumhidroxidot adva hozzá egy órán át állni hagyjuk, majd 1,08 ml jégecettel semlegesítjük. Az oldatot bepároljuk és a maradékot szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:20:6:11) elegyben. A tiszta főterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk, a maradékot kloroformbutanol (1:1) elegyében oldjuk és 0 C° hőmérsékleten előbb 0,5 n sósavval, majd vízzel mos. suk, szárítjuk. Az oldat bepárlása után kapott maradékot éterrel eldörzsöljük. 7,15 g (64%) védett heptapeptid-klórhidrátot nyerünk. Rf1 0,14—^0,20. [a]20 D —22° (c = 1, etanolban). Analízis: CgoH73 0 12 N 12 Cl (1069,64); számított: C 56,14, H 6,88, N 15,72; talált: C 56,2, H 7,0, N. 15,7. 4. lépés H-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly— . —OH-HC1 6,0 g védett heptapeptid-klórhidrátot feloldunk metanolban és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A dekarbobenzoxilezés végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a párlási maradékot éterrel eldörzsöljük. 4,25 g (81,5%) heptapeptid-klórhidrátot nyerünk. Rfi 0,04—0,14, Rf« 0,50—'0,58. Trifluorecetsavas szolvolízis után Rf1 0,0, Rf 6 0,33-^0,41. [a]20 D —30° (c = 1, etanolban). Analízis: C42 H 67 O 10 N 12 Cl (935,51); .számított: N 17,97, Cl 3,8; talált: N 18,0, Cl 3,7. 5. lépés Z-Glu(OBu')-His-Phe-OMe 11,8 g Z-His-Phe-OMe [St. Guttmann és R. A. Boissonnas: Helv. Chim. Acta 41, 1852 (1958)] védett dipeptidet 1,04 g sósavat tartalmazó metanolban feloldunk és csontszenes palládium jelenlétében a védő karbobenzoxi csoportot hidrogenolizáljuk. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a kristályos maradékot metanol-éter elegyből átkristályosítjuk. A nyert dipeptidészter-klórhidrát 6,4 g (70%), Op.: 191—193 C° (bomlás közben). Az anyagot 6,87 g karbobenzoxi-glutaminsav-y-terc-butil-a-(p-nitrofenil)-észterrel együtt feloldjuk 90 ml dimetilformamidban, majd 2,6 ml trietilamint adva hozzá két napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot etilacetát-víz elegyben feloldjuk, majd a vizes fázis elválasztása után az organikus részt mossuk 5% vizes trietilamin-oldattal, vízzel, szárítjuk és bepároljuk. A párlási maradékot metanol-víz elegyből kristályosítjuk. 7,5 g (78%) védett tripeptidésztert ka-5 punk. Op.: 180—482 C°. 6. lépés Z-Glu(OBu')-His-Phe-N2 H 3 10 12,7 g védett tripeptidésztert feloldunk metanolban és szobahőmérsékleten 3,2 ml 94%-os hidrazinhidrát-oldatot adva hozzá három napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd be-15 pároljuk, a maradékot kénsav mellett vákuumban szárítjuk. A nyert habot etanol-víz (1:1) elegyből kristályosítjuk. 11,0 g (86,5%) védett tripeptidhidrazidot kapunk. Op.: 209^210 C°. 20 Analízis: C32 H 4 i0 7 N 7 (635,73); számított: hidrazid-N 4,4%, talált: 4,6%. 7. lépés 25 Z-Glu(OBuO-His-Phe-Arg-Tiy-Gly-Lys(BOC). -Pro-Val-Gly—OH 9,0 ml dimetilformamidban feloldunk 3,2 g védett tripeptidhidrazidot és —30 C° hőmér-20 sékleten hozzáadunk 720 mg sósavat tartalmazó 10 ml tetrahidrofurán-oldatot, majd 0,84 ml izoamilnitritet és 5 perc keverés után 4,0 ml trietilamint. Végül 12,0 ml dimetilformamidban oldva 5,4 g heptapeptidet (4. lépés) adunk a 35 keletkezett azid-oldathoz. A reakcióelegyet egy óra hosszat —10 C° és —20 C° közötti hőmérsékleten keverjük, majd éjszakán át 0 C° hőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegy bepárlása után a maradékot vízzel eldörzsöljük, 40 szárítjuk és a száraz nyersterméket szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk etilacetát-ecetsav-víz (60:20:6:11) elegyben. A főterméket tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és kevés absz. metilalko-45 holos oldatából éterrel csapjuk ki. 4,0 g (47%) védett dekapeptidet nyerünk. Rf 0,15—0,:20. 8. lépés 50 H-Glu(OBu')-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly—OH • HC1 3,5 g védett dekapeptidet (7. lépés) 80 ml etanol — 10 ml víz — 1 ml jégecet elegyében 55 hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a maradékot 10 ml metanol-oldatból 100 ml éterrel kicsapjuk. A csapadékot szűrjük és szárítjuk. 3,0 g (100%) 60 szabad dekapeptidet kapunk. Rf1 0,01—'0,05. 9. lépés H-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-65 -Gly—OH 5
