155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
25 59,5 g (73%) tetrapeptidet nyerünk. Op.: 192— 193 C°. 9. lépés Z-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(Bu')-Pro—OH 410 ml vízmentes dimetilformamidban rázogatás közben feloldunk 41,0 g H-Lys(BOC)-Val-Tyr(Bu')-Pro—OH tetrapeptidet és 8,6 ml trietilamint, majd 21,5 g Z-Vál—ONSu aktív észtert adunk hozzá. A reakcióelegy másnapig szobahőmérsékleten áll. Ezután vákuumban bepároljuk, a maradékot 800 ml kloroformban oldjuk, majd 10%ros citromsav-oldattal, vízzel kirázzuk és szárítás után a kloroformot ledesztilláljuk. 51,0 g (93%) védett pentapeptidet kapunk a bepárlási maradék petroléteres eldörzsölésével. Op.: 123—126 C°. 10. lépés Z-Val-Lys:(BOC)-Val-Tyr(Bu0-Pro—ONSu 400 ml vízmentes dioxánban feloldunk 51,5 g Z-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(Bu')-Pro—OH pentapeptidet és 13,2 g N-hidroxiszukcinimidet, majd jegesvizes hűtés mellett 12,1 g diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Fél óráig hidegen tartjuk, majd másnapig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot 1 liter etilacetátban oldjuk és háromszor 300 ml 2%-os nátriumhidrokarbonát-oldattal mossuk. Szárítás után az etilacetátot vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot vízmentes éterrel eldörzsöljük, szűrjük, vákuumban foszforpentoxid mellett szárítjuk. 49,0 g (86%) aktív észtert nyerünk. Op.: 171—173 C°. 11. lépés H-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(BuO-Pro-Asp(OBu')-Gly-Ala-GlutOBuO-OBu' 37,2 g Z-AspíOBuO-Gly-Ala-GlutOBuO-OBu' tetrapeptidet 400 ml 80%-os ecetsavban oldunk és csontszenes palládium jelenlétében hidrogenolizáljuk. A katalizátor kiszűrése után az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, majd á visszamaradó olajat 330 ml vízben oldjuk és az oldatot nátrium-karbonáttal meglúgosítjuk (pH 9). A leváló olajat etilacetáttal kirázzuk és szárítás után vákuumban ledesztilláljuk az oldószert. Az így kapott tetrapeptidésztert 350 ml vízmentes dioxánban oldjuk és 48,9 g Z-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(Bu0-Pro—ONSu pentapeptid aktívésztert adunk hozzá. Miután a reakcióelegyet 20 órán át szobahőmérsékleten állni hagytuk, vákuumban bepároljuk, 700 ml etilacetátiban oldjuk és vízzel, 10%-os citromsav oldattal, 8%-os nátrium-hidrokarbonát oldattal, vízzel kimossuk és szárítás után vákuumban bepároljuk. A kapott nyers karbobenziloxi-nonapeptidésztert 1 liter 80%-os ecetsavban oldjuk, majd .26 csontszenes palládium jelenlétében hidrogenolizáljuk.: A katalizátor kiszűrése . után az oldószert vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot 1 liter etilacetátban oldjuk. Kétszer 150 ml 5 10%-os citromsav oldattal, majd 5%-os nátriumkarbonát oldattal mossuk és szárítás után az etilacetátot ledesztilláljuk. A visszamaradó oldószerszagú gyantát petroléterrel eldörzsöljük, szűrjük és foszforpentoxid mellett vákuumban 10 szárítjuk. 49,5 g (77%) nonapeptidésztert kapunk. Op.: 135—140 C°, l = 268 nm, log <? = 2,71 (etanol). Analízis: C^HIOSNKA, (1301,60) 15 számított: C 59,98, H 8,36, N 10,76, talált: C 59,25, H 8,70, N 10,66. 12. lépés 20 Z-Lys(B0C)-Lys(B0C)-Arg(N02 )-Arg(N0 2 )-Pro-Val-LysíBOCJ-Val-TyríBuO-Pro-AspíOBuO-Gly-Ala-Glu(OBu 0-OBu' 451 mg nonapeptidet (10. példa 11. lépés) és 25 426 mg védett pentapeptid-p-nitrofenilésztert (7. példa 3. lépés a. pont) 0,7 ml dimetilformamidban oldunk és két napon át szobahőfokon hagyjuk állni. A reakcióelegyet éterrel eldörzsöljük és a kapott terméket etilacetát-éterből 3° négyszer egymás után átcsapjuk. Végül 735 mg (88,5%) védett tetradekapeptidésztert kapunk. Rf2 0,75—0,85, Rf4 0,26-^0,36. [<z]20 D = 65,7°, (c=l, metanolban). 35 Analízis: Cniíi^O^N^ (2391,78); számított: C 56,2 H 7,7, N 14,6; talált: C 56,05, H 7,8, N 14/5. 13. lépés 40 H-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(Buf )-Pro-Asp(OBu')-Gly-Ala-GluíOBuO-OBu'-S HC1 45 6,1 g védett tetradekapeptidésztert 300 ml jégecetben hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, a maradékot feloldjuk 50 ml vízben és jeges-víz hűtés mellett 50 20 ml 0,5 n sósavat adunk hozzá. A peptidet 10 ml telített konyhasó oldattal csapjuk ki a vizes oldatból. Szűrjük és szárítjuk. A száraz anyagot 80 ml kloroform — 80 ml etanol elegygyel eldörzsöljük, a nem oldódó szervetlen sókat 55 kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, a maradékot szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk kloroform-metanol-víz (60 : 26 : 5) eleggyel. A főterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és bepároljuk, éterrel eldörzsöljük. 4,35 g 60 (76%) tetradekapeptid-triklórhidrátot nyerünk. Rf7 0,37—0,47. Rf 9 0,55—0,60. Analízis: Zx ^ wi 0^ 2 i^\ z (2277,05): számított: N 14,2, Cl 4,65; 65 talált: N 14,15, Cl 4,65. 13
