155873. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tisztított amiloglukozidáz-készítmények előállítására

155873 Savas kezelés előtt Savas kezelés után D. U.-érték 64 óra után 4. példa: 94,fi% 97,9% 200 ml Aspergillus flavus kultúra-folyadékot, amely 32 E/|ml aktivitást tartalmazott, 24 óra hosszat 1,90 pH-értéken tartottunk 10 C° hőmérsékleten, előzőleg 12 ml N kénsav-oldatot adva hozzá. Az amiloglukozidáz-veszteség 6% volt, míg a transzglukozidáz-aktivitás 95% veszteséget mutatott. Az 1. példa b) pontjában leírt módszerrel történő meghatározás szerint megállapítottuk az elérhető maximális D. U.-értéket, 25 ml ill. 27,5 ml kezeletlen ill. savval kezelt enzimkészítmény esetében. Az alábbi értékeket kaptuk: 10 15 20 10 6. példa: 200 ml Aspergillus niger kultúra-folyadékot, amelynek aktivitása 78 E/ml volt, 4 N foszforsavoldat hozzáadása után 30 percig 2,40 pH-értéken tartottunk, 40 C° hőmérsékleten. Ezután az oldat pH-értékét 10 ml 2 N ammóniumhidroxid-oldat hozzáadásával 4,2-re állítottuk. A találmány szerinti kezelésnek az enzimkészítmény aktivitására és a keményítő glukózzá történő hidrolízisére gyakorolt előnyös hatást az alábbi táblázat adatait mutatják: Amiloglukozidáz-aktivitás Aktivitásveszteség Savas kezelés előtt 78 E/ml Savas kezelés után 69 E/ml Amilo- Transzgluko- glukozidáz zidáz 5% 91% Savas kezelés előtt Savas kezelés után D. U.-érték 89,6% 97,9% 25 Savas kezelés előtt Savas kezelés után D. U.-érték 94,8% 98,4% A D. U.-érték javulás tehát a találmány sze- 30 A D. U.-érték tehát ebben az esetben is szárinti kezelés esetében meghaladta a 8%-ot. mottevő mértékben javult a találmány szerinti savas kezelés hatására. 5. példa: 200 ml Aspergillus niger kultúra-folyadékot, amely 78 E/ml aktivitást tartalmazott és amelyhez 12 ml 1,5 N sósavat adtunk, 23 percig 1,65 pH-értéken tartottunk 19 C° hőmérsékleten. Ezután az oldat pH-értékét 18 ml 2 N ammóniumhidroxidoldat hozzáadásával 4,2-re állítottuk. A találmány szerinti kezelésnek az enzimkészítmény aktivitására és az ilyen enzimkészítménnyel lefolytatott keményítő-hidrolízisre gyakorolt előnyös hatását az alábbi táblázat szemlélteti: Amiloglukozidáz-aktivitás Akti vitásveszteség Savas kezelés előtt Savas kezelés után Amilo- Transzglufco- glukozidáz zidáz 78,0 E/ml 63,8 E/ml 6% 90% Savas kezelés előtt D. U.-érték 95,0% Savas kezelés után 98,5% 3ö 40 45 50 55 60 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás amilöglukozidáz-készítmények tisztítására, azzal jellemezve, hogy a tisztítandó enzim vizes oldatát 2,5 alatti pH-értéken 60 C° alatti hőmérsékleten, előnyösen 24 órát meg nem haladó ideig inkubáltatjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az inikubáltatást 1,8—2,0 pH-értéken folytatjuk le. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként az enzimet termelő mikroorganizmus kultúra-folyadékát alkalmazzuk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a kultúra-folyadékot szobahőmérsékleten legfeljebb 24 óra hosszat inkubáltatjuk 1,8—2,0 pH-értéken. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy egy oly enzim-koncentrátum vizes oldatát, amely egy- vagy többféle sót, pl. ammóniumkloridot, nátriumkloridot, kalciumkloridot és/vagy magnéziumszulfátot 0,5 moláris koncentrációban tartalmaz, szobahőfokon 6 óra hosszat inkubáltatunk 2,4— 2,5 pH-értéken. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6908336. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 5