155872. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunokémiai meghatározások céljaira alkalmas eritrocita-készítmény előállítására

5 Azt találtuk, hogy a találmány szerinti eljárással kezelt eritrocitáknak nemcsak a mechanikai tulajdonságai javultak lényegesen, hanem az antiiszérummai való agglutináció iránti érzékenységük is megnövekedett. így teljes 5 agglutináció érhető el HCG-vel érzékenyített eritrocitáknak a találmány szerinti eljárással nem kezelt szüszpenziójia esetében 1/2500 hígítású antiszérummal, míg a találmány szerinti eljárással kezelt eritrociták esetében ugyanez 10 a szuszpenzió' már 1/7500—d/15 OÖÜ hígításban is ugyanilyen reakciót vált ki. A találmány azonban nincsen korlátozva HCG-vel érzékenyített eritrociták alkalmazására; alkalmazható a találmány szerinti eljárás 15 bármely oly antigénnel való érzékenyítés esetében, amely a találmány szerinti formaldehides kezeléssel összefér. Az immunokémiai meghatározásokra a ta^ lálmány szerinti eljárással érzékenyített eritro- 20 citák szuszpenziója akár pl. fagyasztva-szárítással, akár porlasztó-szárítással vihető szilárd állapotba és sajtolható tablettákká. A találmány szerinti eljárással kapott eritrocita-szuszpenzió fagyasztva-szárítással való 25 kezelése útján kapott por igen higroszkópos és ezért ezt viszonylag kis nedvességtartalmú, előnyösen 20%-nál kevesebb nedvességet tartalmazó légkörben keverjük egyéb segédanyagokkal és sajtoljuk tablettákká. Előnyös oly 30 segédanyagokat alkalmazni és oly módon sajtolni a tablettákat, hogy ezek szétesési ideje viszonylag rövid, pl. 3 percnél rövidebb legyen. A találmány szerinti eljárással kapcsolatban előnyösen alkalmazható segédanyagok, ame- 35 lyekkel terhességi reakciók kivitelezésére alkalmas tablettákat készíthetünk, pl. a következők: töltőanyagként szaharóz, mannit, tejcukor, karbamid; símítószerként: bórsav, keményítő, „Carbowax 4000", magnéziumsztearát; 40 a tabletták szétesését elősegítő adalékként keményítő vagy alginsav. A tabletták további alkotórészeiként az említett meghatározási módszerhez való anyagok, mint foszfátok, pl. monokáliumfoszfát vagy dinátriumfoszfát, mint a 45 tablettákból készítendő szuszpenzió puffer-anyagai. továbbá kelátképzőszereik, mint az etiléndiaminntetraecetsav (EDTA) dinátriumsója vagy albumin alkalmazhatók. A szükséges alkotórészeket száraz állapotban keverhetjük a 50 találmány szerinti módon kezelt eritrocitákkal a tablettázás előtt, de előnyösebb oly módon eljárni, hogy az oldható alkotórészeket előbb oldatba visszük, majd porlasztva szárítjuk őket és azután keverjük a találmány szerinti mó- 55 don kezelt eritrocitákkal; így homogén keveréket kapunk és kizárjuk annak a veszélyét, hogy az eritrociták károsodjanak a segédanyagok durva kristályos alakban való hozzákeverése során bekövetkezhető (mechanikai ártalom 60 következtében. A nem oldódó segédanyagok feldolgozása sarán különös figyelmet kell fordítani arra,, hogy ezek ne zavarhassák a tablettákkal készített szuszpenzióval lefolytatásra kerülő meg- 65 6 határozást. Minthogy az oldhatatlan alkotórészek könnyen megváltoztatják az <eritrociták ülepedési módját, ezek az anyagok kedvezőtlenül befolyásolhatják a meghatározás pontosságát. A találmány szerinti eljárás előnyös kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik; megjegyzendő azonban, hogy a találmány köre semmiképpen sincsen e példákra korlátozva. 1. példa: Juh-eritrocitákat szuszpenzióban ismert módon formalinnal és tanninnal kezelünk, majd a szuszpenziót centrifugáljuk, 6,4 pH-értékű foszfát-nátriumklorid puffer-oldattal mossuk, majd ilyen pufferoldatba visszük a szuszpenziót. Az így kapott elegyhez egyenlő térfogatú 50 NE/ml koncentrációjú HCG-oldatot adunk, ugyancsak 6,4 pH-értékű pufferoldattal készítve. Ezt az elegyet 48 óra hosszat hagyjuk állni 37 C° hőmérsékleten, majd formaldehidet adunk hozzá 0,25 súly/tf% végső formaldehid-koncentráció eléréséig. Az így kapott elegyet 37 C° hőmérsékleten 15 óra hosszat állni hagyjuk, majd az eritrocitákat ismét centrifugáljuk, fiziológiás sóoldattal mossuk, majd 0,1% bovin-szérumalbumint tartalmazó fiziológiás nátriumkloridoldattal 10 tf/tf%-os szuszpenziót készítünk belőlük és néhány napig 0—4 C° hőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután az eritrocitákat centrifugáljuk, fiziológiás sóoldattal mossuk és ismert módon fagyasztva szárítjuk. Az így kapott por kitűnően felhasználható HCG-r eagensként. 2. példa: Az 1. példában leírthoz hasonló módon készített 300 ml 6,4 pH-értékű eritrocita-szuszpenziót 300 ml 50 NE/ml koncentrációjú, 7,6 pH-értékű HCG-oldattal, majd 0,5% végső koncentrációjú formaldehiddel kezeljük. A szuszpenziót fagyasztva szárítjuk, majd a kapott port tablettákká sajtoljuk. Az így kapott tablettákkal kitűnő eredményeket kaptunk immunokémiai terhességi vizsgálatok során. 3. példa: Eritrocitákat az 1. példában leírthoz hasonló módon HCG-vel érzékenyítettünk 0,25% végső koncentrációjú formaldehid jelenlétében; a formaldehidet az utolsó 24 órában, 30 C° hőmérsékleten alkalmaztuk. A szuszpenziót ezután fagyasztva szárítjuk és a kapott port tablettákká sajtoljuk; az így kapott tabletták kitűnő eredményeket adtak a HCG-reakcióhan. 4. példa: Az eritrocitákat az 1. példában leírt módon HCG-vel érzékenyítettük, a kezelés utolsó 15 órájában formaldehides kezelést is alkalmazva, 3