155718. lajstromszámú szabadalom • Eljárás acetilglukozidok előállítására lanatozid-vegyületek mikrobiológiai átalakítása útján

7 és enyhébb, később jelentkező mellékhatások kísérik (Schw. Med. Woch. 83, 266, 1953). 4. Ugyanezen eljárással B- és C-lanatozidból acetilgitoxin és acetildigoxin állítható elő, így a B- és C-sorba tartozó glukozidokra vonatkozóan 5 is az Izolanid és digoxin mellett értékes vegyületekkel szaporodik az előállítható termékféleségek száma. 5. C-lanatozid kinyerése utáni melléktermékek, amennyiben azok híg alkoholos-vizes olda- 10 tok, a dezacetilezés szükségtelen volta miatt termékk ínyerés nélkül, közvetlenül is fermentálhatok. 6. Izolanid-gyártás melléktermékeként nyert A-lanatozid fermentálása esetén a néhány száza- 15 lékban jelenlevő maradék B és C-lanatozid acetilgitoxin és acetil-digitoxinként hasznosítható. A találmány szerinti eljárás tehát lehetőséget ad arra, hogy a) Lanataglukozidok előállítása során a ter- 20 mékféleségeket két klinikailag értékes vegyülettel, az acetildigitoxinnal és acetildigoxinnal szaporítsuk, b) azokat a megfelelő lanatozid-vegyületekből egy lépésben és gazdaságosan állítsuk elő, és 25 c) szubsztrátumként az Izolanid-gyártás melléktermékét használva fel, a növényben jelentevő A-, B- és C-sorbeli glukozidokat gyakorlatilag teljes mennyiségükben hasznosítsuk és a drog-felhasználás gazdaságosságát nagymérték- 30 ben fokozzuk. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait az alábbi példák szemléltetik: 1. példa 35 Fusarium moniliforme spóráit 103 spóra/ml-es hígításban, 0,15 M pH 6,0-os foszfát pufferban 0,35 A Hanau lámpa ultraibolya besugárzásának tesszük ki, majd 99%-os pusztulást előidéző besugárzás után kivett minta egykonidium tényé- 40 szeteiből kiválasztunk olyan kultúrát, amely acetildigitoxin szubsztrátumon vizsgálva észteráz-negatívnak bizonyul. Ennek konidiumaival beoltunk 100 ml kukoricalekvár-glukózos táptalajt, a rázatás mellett 48 óra alatt' kifejlődött 45 micéliumot leszűrjük, 300 ml csapvízzel szuszpendáljuk, a szuszpenzió pH értékét híg sósavval 5,0-re állítjuk. A szuszpenzióhoz 600 mg A-lanatozidot adagolunk, az inkubálást 26 C°-on 36 órán át folytatjuk, majd a fermentlé butanol- 50 benzolos (4 : 1) extraktumát rétegkromatográfiásan vizsgáljuk. Metiletilketon-xilol-metilcelloszolv-víz elegyben futtatva a szubsztrátum A-lanatozid foltja ismert előhívó reagensek egyikével sem mutatható ki, ugyanakkor egységes 55 glukozid-folt jelentkezik az acetil-digitoxinnak megfelelő 0,67 Rf értéknél. Kvantitatív eluciós papírkromatográfiával, ugyanilyen rendszerben végezve az elválasztást, 97%-os átalakulást állapíthatunk meg. 60 2. példa Az 1. példában leírt módszerrel kezelt törzs konidiumaival beoltunk 100 ml burgonyáié táptalajt. (20 g hámozott burgonya főzete, pH-ja 65 8 6,5.) A tenyészetet rázólombikban 48 órán át inkubáljuk; a növesztés végén a tenyészet pH-ja 6,0—6,5, micélium-tartalma 3—5 g. A tenyészethez 2 ml metanolban oldott 200 mg A-lanatozidot adagolunk és az inkubálást 28 °C-on 36 órán át folytatjuk. Ezután a fermentlé butanol-benzolos (4 : 4) extraktumát kromatográfiásan vizsgálva a szubsztrát A-lanatozid foltja nem mutatható ki. Az acetildigitoxin foltot eluálva, a xanthidrolos reagenssel képzett színes vegyület fényelnyelése alapján, határozzuk meg. A számított termékmennyiség 150 mg. 2. példa Saját izolálású Fusarium sp. rizs-tenyészetről származó konidiumaival 5 liter, majd ezt felhasználva további 200 liter tenyészetet állítunk elő. A tenyésztés táptalaja, mindkét fázisban 2% kukoricalekvár, 4% tejcukor, 0,6% nátriumszulfát, pH értéke 6,5. A tenyésztés ideje 48 óra, hőmérséklete 24 C°; a dúsabb micéliumnövekedés érdekében a tenyészetet lassú keveréssel (150 m) levegőztetjük. Szűréssel a kultúrából 8 kg nedves micéliumot választunk el, ami megfelel 3 kg száraz micéliumnak. A kiszűrt micéliumot szárítás nélkül 500 liter 0,05 mól 4,5 pH értékű ammóniumacetátban szuszpendáljuk, és az alábbi módon G4anatozidtól mentesített és A-lanatozidban dús Izolanid-gyártási melléktermék 1 kg-ját adjuk hozzá: Az Izolanid-gyártásból származó 86% összglukozid-tartalmú mellékterméket, amely 5% C-lanatozidot és 60% A-lanatozidot tartalmaz, kloroform-metanol 1 :1 elegyben oldjuk, az oldószerek arányát további kloroform hozzáadásával 7 :2-re állítjuk és az oldathoz benzolt, majd vizet adunk. Az alsó klór of orm-benzolos fázist elválasztva a vizes metanolos részt kloroform-benzollal ismételten kirázzuk, az oldatokat egyesítjük, szárazra pároljuk és a maradékot 15 liter metanolban oldjuk. Az így előállított lanatozid-oldatnak a mieélium-szuszpenzióhoz való hozzáadása után az átalakítást levegőztetés, keverés mellett addig folytatjuk, míg a rétegkromatográf iával végzett ellenőrzés szerint A-lanatozid maradék már csak 5% alatti mennyiségben mutatható ki. Ekkor a fermentációt leállítjuk, a fermentlevet ismételten kloroformmal extraháljuk, az egyesített extraktumokat szárazra pároljuk. A száraz maradékot metanolban oldjuk, hozzá benzolt, majd vizet adunk. Az elváló benzolt leválasztva az extrahálást benzollal ismételjük. Az egyesített benzolos extrakt tartalmazza a nyers acetildigitoxint, mennyisége 280 g. 3. példa A 2. példa szerinti tenyészet micéliumával az Izolanid-gyártás melléktermékéből végzett oldószeres elválasztás vizes-alkoholos glukozid-oldätát alakítjuk át. Ebből a célból a kloroform-benzolos kirázások metanolos-vizes anyalúgját, amely A, B és C-lanatozidot 2:1:1 arányban tartalmaz, vákuum-desztillációval kb. 1 g/liter 4