155628. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lincomicin S előállítására
155628 8 legesítésével állíthatjuk elő, 7,0 pH alatti, előnyösen kb. 2—6 pH értéken. Alkalmas savak erre a célra a következők: sósav, kénsav, foszforsav, ecetsav, borostyánkősav, citromsav, tejsav, maleinsav, fumársav, embonsav, kólsav, palmitinsav, nyálkasav, kámforsav, glutársav, glikolsav, ftálsav, borkősav, laurinsav, sztearinsav, szalicilsav, 3-fenilszalicilsav, 5-fenilszalicilsav, 3-metilglutársav, o-szulfobenzoesav, ciklohexánszulfonsav, ciklopentán-propionsav, 1,2-ciklohexán-dikarbonsav, 4-ciklohexén-karbonsav, oktadecenil-borostyánkősav, oktenil-borostyánkősav, metánszulfonsav, benzolszulfonsav, heliantinsav Reinecke-sav, dimetilditiokarbaminsav, szorbinsav, monoklórecetsav, undecilénsav, 4'-hidroxi-azobenzol-4-szulfonsav, oktadecilkénsav, pikrinsav, benzoesav, fahéjsav és hasonlók. A lincomicin S sóit ugyanazokra a biológiai célokra használhatjuk, mint a szabad bázist. A sókat még az antibiotikum tisztítására is alkalmazhatjuk úgy, hogy azt egymást követően átalakítjuk a protonált-formából a nem protonált formába és megfordítva, s közbeesőén másféle műveleteket, így például oldószeres extrakciót és mosást, kromatografálást és frakcionált folyadék-folyadék extrakciót végzünk. Pl. az antibiotikumot átalakíthatjuk oldhatatlan sójává, pl. pikráttá, ezt tisztítási műveleteknek vethetjük alá és aztán lúggal történő kezeléssel felszabadíthatjuk belőle a szabad antibiotikum-bázist. Vagy pedig átalakíthatjuk az antibiotikumot ej?y vízben oldható sóvá, így hidrokloriddá vagy szulfáttá, a só vizes oldatát különféle vízzel nem elegyedő oldószerekkel extraháljuk és az így kivonatolt savanyú oldatból a szabad antibiotikum-bázist valamilyen lúggal történő kezeléssel felszabadítjuk. A lincomicin S-t használhatjuk S. aureus leküzdésére elmosogatott és lerakott konyhai eszközökön. Használhatjuk még különféle S. aureus-szal fertőzött fogorvosi és orvosi felszerelések fertőtlenítésére. A lincomicin S hatásos a Bacillus subtilis ellen és alkalmazhatjuk selyemhernyó tenyésztésére szolgáló tárgyak kezelésére, ezzel megakadályozhatjuk, vagy a lehető legkisebbre visszaszoríthatjuk az említett mikroorganizmus által okozott fertőzéseket. Használható még a szóban forgó mikroorganizmus által halakon és halasládákon okozott szag megszüntetésére vagy csökkentésére. A következő példák a jelen találmány szerinti eljárást és annak termékeit szemléltetik anélkül azonban, hogy a találmányt magát korlátoznánk. Amennyiben más megjegyzés nincsen, úgy a százalékok súlyszázalékokat jelentenek és az oldószerelegyek térfogat szerint megadottak. 1. példa. Lincomicin S Fermentáció lombik tartalmának beoltására; a sorozat minden egyes tagja 100 ml oltótáptalajt tartalmaz, melynek összetétele a következő: Yeastolac* 10 g Glukóz-monohidrát 10 g N-Z-Amine-B" 5 g Csapvíz q. s. 1 literre 10 Az említett oltótáptalajt kb. 7,3 pH-n sterilizáltuk. A táptalajba oltott mikroorganizmusokat 2 napig 28 C°-on Gump-féle forgó-rázó-berendezésben tenyésztjük 250 ford/perc fordulatszám és kb. 6,25 cm lökethossz mellett. 15 A fent ismertetett oltótáptalajból 5% (azaz 5 ml) inokulumot hozzáadunk egy 500 ml-es Erlenmeyer-lombikból álló sorozat minden egyes tagjához; mindegyek lombik 100 ml-t tartalmaz az alábbi összetételű fermentációs oldatból: 20 Glukóz-monohidrát 30,0 g/liter Nátriumcitrát 3,0 g/liter ZnS04 .7H 2 O 0,001 g/liter FeC04 .7H 2 0 0,001 g/liter 25 MgS04 1,0 g/liter K2 HP0 4 2,5 g/liter NaCl 0,5 g/liter NH4NO3 2,0 g/liter Ionmentes víz q. s. 1,0 liter 30 A glukóz-monohidrátot és a nátriumcitrátot a sóktól különállóan sterilizáljuk. A fermentációs közeget 7,3—7,8 pH tartományban utánsterilizáljuk. A beoltott fermentációs lombikokat 35 egy Gump-féle forgó-rázó készülékben helyezzük el, amely 250 ford/perc fordulatszámmal működik kb. 6,25 cm lökethossz mellett. A rázóberendezést inkubátor helyiségben 28 C° hőmérsékleten tartjuk. 72 óra fermentációs idő után 40 500 mg/liter DL-etionint adunk a fermentációs lombikokba aszeptikus körülmények közö'tt. A fermentációt a 6. napon vágjuk le. Hasonló módon olyan fermentációt is végezhetünk, melynek során a DL-etionin helyett 45 L-etionint alkalmazunk. Kinyerés A fent leírt lincomicin S-fermentációból nyert 50 teljes fermentlevet a „levágás" pH-ján szűrjük; szükség esetén valamilyen szűrési segédanyagot, pl. diatoma-földet alkalmazunk. A micélium-lepényt vízzel mosuk és a lepényt ezután eldobjuk. A szűrt fermentlevet és a mosóvizet 55 egyesítjük és 50%-os nátriumhidroxidoldattal 10-es pH-ra állítjuk be, majd három ízben, alkalmanként 1/4 térfogatnyi metilénkloriddal extraháljuk. A metilénkloridos kivonatokat egyesítjük és betöményítjük egy olajos anyaggá. 60 Streptomyces lincolnensis var. lincolnensis NRRL 2936 ferde táptalajon nőtt tenyészetét felhasználjuk egy sorozat 500 ml-es Erlenmeyer-65 * A Yeastolac élesztőseitek proteintartalmú hidrolizátuma. •* Az N-Z-Amlne-B Sheffield szerint enzimatikusan lebontott kazein. 4
