155617. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rubidomicin előállítására

155617 6 37 C°-ra, és kevertetjük. Meghatározott időközökben 30 mikroliter térfogatú mintát veszünk mindegyik oldatból, és elhelyezzük 7 pH-jú foszfát bufferral impregnált vékony kovasavgél rétegen. A kromatogramokat 5 : 5 : 2,5 térfogatarányú n-butanol-etilacetát-víz keverék oldatfázisával futtatjuk. Lekaparással összegyűjtjük az elválasztott összetevőket tartalmazó kovasavgél zónákat. Ezeket kovasavgél-frakciókat 9 :1 térfogatarányú metanol-sósav eleggyel eluáljuk. Az eluátumokat másfél óra hosszat 50 C°-on tartjuk a rubidomicinnek és a 13 213 R. P.-nek 13 567 R. P.-vé való hidrolizálására. Megmérjük az oldatok abszorpcióját 480 nmnél és ebből következtetünk rubidomicin-, 13 213 R. P.- és 13 567 R. P.-tartalmukra. A 2. táblázatban összefoglaltuk a kapott eredményeket: o 09 CM 05 l-f CS © •5f © CM o in o záadunk 10 ml 96 :4 térfogatarányú n-butanol-6n sósav elegyet. Az oldatokat 20, illetve 30 C°on tartva kevertetjük. Meghatározott időközökben (2., 4., 8. és 16. órában) megállapítjuk egy 20 C°-on tartott és egy 30 C°-on tartott oldat összetételét. E célból az oldathoz 150 ml 1 :1 tér-10 15 20 25 30 35 40 45 fogatarányú aceton-hexán elegyet adunk a rubidomicin és a 13 213 R. P. leválasztására. A kapott termékeket szűrőre visszük, mossuk, centrifugáljuk, szárítjuk, és kolorimetriás úton meghatározzuk rubidomicin-tartalmukat és turbidimetriás módszerrel Klebsiella pneumoniae-t alkalmazva érzékeny törzsként, 13 213 R. P.-tartalmukat. A 4. táblázatban összefoglaljuk a kapott eredményeket. 3. példa 51 5 mg/ml koncentrációjú oldatot készítünk rubidomicinből és tiszta 13 213 R. P.-ből 1 :1 arányú etilacetát-metanol elegyben. Ezeknek az oldatoknak alikvot frakcióihoz hozzáadunk annyi 1 n sósavat, amennyi megfelel 2, illetve 8 ml-nek 55 1 g kiindulási anyagra számítva. Ezeket az oldatokat a 2. példában leírt módon kezeljük. A 3. táblázatban közöljük a kapott eredményeket. 4. példa 60 Nyolc 1 g-os adag, 345 //g/mg rubidomieint és 400 /íg/mg 13 213 R. P.-t tartalmazó nyers 9865 R. P. antibiotikumot külön-külön feloldunk 5—5 ml kloroformban. Mindegyik oldathoz hoz- 65 5. példa 1840 ml 1:1 arányú metanol-etilacetát elegyben feloldunk 46 g-ot egy 150 /íg/mg rubidomieint, 650 /tg/mg 13 213 R. P.-t és 200 /ig/mg 13 567 R. P.-t tartalmazó termékből (9685 R. P.ből visszamaradt frakció a rubidomicin zömének eltávolítása után). Hozzáadunk 55 ml 1 n sósavat. A keveréket keverés közben 10 óra hosszat 37 C°-on tartjuk. Ezután 30 C°-on 20 torr nyomás alatt bepároljuk 500 ml-re. Hozzáadunk 500 ml butanolt, és ismét 500 ml-re koncentráljuk. Az így kapott butanolos oldatot 5000 ml hexánnal kezeljük. A csapadékot szűrőre visszük, mossuk, centrifugáljuk, és megszárítjuk. 42 g terméket kapunk az 5. táblázatban közölt tulajdonságokkal. a 2. táblázat %-os tartalom, az idő függvényében Ó~h Th 2~h Ül 6~h 2Th Meghatározott összetevők rubidomicin 13 567 R. P. 13 213 R. P. rubidomicin 13 567 R.P. Termék rubidomicin 13 213 R. P. 3. táblázat Meghat, %-os tartalom, az idő függvényében összetevők Oh lh 2h 4 h 6 h 24 h 1 n sósav Kezelt termék rubidomicin 2 ml/g : 13 213 R. P. rubidomicin 13 567 R. P. 13 213 R. P. rubidomicin 13 567 R. P.