155615. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergolinvázas vegyületek izolálására vizes oldatból

155615 Ugyancsak ismert és gyakran alkalmazott eljárás az ergolinvázas vegyületeknek vizes oldatból adszorbenssel, vagy ioncserélő gyantával történő elkülönítése. Pl. az 1 463 426 sz. francia szabadalmi leírásban leírt eljárás szerint az ergolinvázas származékokat vizes oldatból, enyhén savas közegből adszorbeáltatják aktív szénnel; a leoldást ammóniával lúgosított metanollal végzik. Hasonló utat követ az 1 465 392 sz. francia leírásban közölt eljárás. A 6 409 763 sz. holland szabadalmi leírás szerint a 6-metil-8,9-ergolin-8-karbonsavat szaprofita tenyészetből kationcserélő gyantával vonják ki, majd ammóniaoldattal szorítják ki a gyantáról. Mind az adszorbensről, mind ioncserélő gyantáról az ergolinvázas vegyületeket csak lúgos oldószerrel, többnyire lúgosított alkohollal lehet leoldani. Ez a lépés a lúgos közegből történő fázisváltásokhoz hasonlóan az alkaloidok gyors bomlását eredményezi. A parazita módon rozsnövényen termett anyarozs alkaloidtartalmának kinyrésére folytatott korábbi vizsgálataink során (152 934 sz. magyar szabadalmi leírás) azt találtuk, hogy a megőrölt, száraz anyarozs drog kivonatolására igen jól alkalmazható az aceton, mely kitűnő oldóképességgel rendelkezik mind a peptid-, mind vízoldható típusú alkaloidok tekintetében. A szaprofita tenyészetek azonban acetonnal nem extrahálhatók, minthogy ezekben a termelt alkaloidok vizes fázisban vannak jelen és az aceton korlátlanul elegyedik vízzel. A jelen találmány azon a meglepő felismerésaen alapul, hogy a híg vizes alkaloidoldatok, illetve a szaprofita kultúrában való anyarozsgomba-termelés útján nyert vizes fermentlevek kivonása acetonnal lehetségessé válik és ez esetben az eddig használatos kivonószerekkel kapottnál lényegesen hatásosabb extrakcíót és egyben fázis-elkülönülését is elérhetjük, ha a vizes közeget valamely szervetlen sóval, pl. ammóniumszulfáttal vagy nátriumkloriddal megfelelő mértékben telítjük. Így a nagy sótartalmú vizes közeg és a viszonylag kis térfogatú aceton különválik. Az ilyen körülmények között alkalmazott aceton megtartja ergolinvázas alkaloidokra vonatkozó igen jó oldóképességét, illetve a vizes közeggel szembeni igen jó megoszlási hányadost; az alkaloidok a feldolgozás szempontjából igen előnyös enyhe körülményeket biztosító pH értékeknél egy-két kivonatolással átoldhatók az acetoznos fázisba, amelyeknek térfogata így csupán kis hányada az extrahált vizes közegének. Ennek az eljárásnak az ergolinvázas alkaloidok izolálása szempontjából tehát további fontos és alkaloidok extrakciója esetében csak igen ritkán elérhető előnye, hogy nem igényel lúgos pH-értéket az acetonnal való kivonatolás során. Lúgos közegben ugyanis a klavin típusú alkaloidok, s különösen az ergometrin, igen bomlékonyak és így a szervetlen sóval telített vagy részlegesen telített vizes közegből a semleges körüli pH-értéken acetonnal történő extrahálás meszszemenően kíméli ezeket az érzékeny alkaloidokat. 5 A találmány tárgya tehát oly eljárás ergolinvázas vegyületek kinyerésére híg vizes oldatokból, elsősorban az említett vizes fermentlevekből szerves oldószeres extrakció útján, amelynek során a vizes közeget 6 és 7 közötti pH-értéken 10 acetonnal extraháljuk, mi mellett a kivont alkaloidokat tartalmazó szerves oldószeres fázisnak a vizes fázistól való elkülönülését a vizes fázis valamely szervetlen sóval, pl. ammóniumszulfáttal vagy nátriumkloriddal való részleges, 15 vagy teljes telítése útján biztosítjuk. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kivitele többféle módon történhet. Eljárhatunk oly módon, hogy a vizes fázist teljesen telítjük a 20 szervetlen sóval, majd a pH-érték beállítása után lefolytatjuk az acetonos kivonást; dolgozhatunk azonban oly módon is, hogy a vizes fázist az acetonnal való kezelés előtt csak részlegesen telítjük szervetlen sóval, majd 6—7 pH-értéken lefolyta-25 tott kivonatolás után a két fázis jó elkülönülésének biztosítására hozzáadjuk a még szükséges további szervetlen sómennyiséget; lehetséges végül oly eljárásmód is, mely szerint először az acetont adjuk a megfelelő pH-értékre beállított 30 vizes oldathoz, majd a szükséges teljes szervetlen sómennyiség hozzáadása útján biztosítjuk a szerves oldószeres fázis elkülönülését. Bármelyik eljárásmód esetében az alkaloido-35 kat tartalmazó szerves fázis jól elkülönül a szervetlen sót tartalmazó vizes fázistól; az alkaloidok gyakorlatilag teljesen az acetonos fázisba mennek át, az így kapott acetonos oldat térfogata pedig csupán egy hányada az eredeti vizes oldat-40 nak. Az acetonos alkaloidoldat további feldolgozása önmagában ismert módon, pl. a 152 934 sz. magyar szabadalmi eljárásban leírtak szerint történhet. 45 A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját az alábbi példák szemléltetik. 1. példa 1000 ml micéliumot tartalmazó szaprofita te-50 nyészetben (ergometrin-tartalom 70 gamma/ml) 400 g ammóniumszulfátot feloldunk, majd az oldat pH-értékét hígított ammóniával 7-re állítjuk be, ezután 250 ml acetonnal kirázzuk. A fázisok elkülönülése után az ergometrin teljes mennyi-55 sége az acetonban van, míg a micélium a fázishatáron gyűlik össze és ettől a szerves fázis jól elkülöníthető. Elválasztás után 280 ml acetonos oldatot kapunk. Ehhez 30 g ammóniumszulfátot adunk és addig rázuk, míg a só feloldódik. Rö-60 vid állás után az acetontól elkülönítjük a sós vizet, mely alkaloidot nem tartalmaz. Az acetonos oldat térfogata 200 ml. Ezt tömény foszforsavval pH 3-ra állítjuk be, majd 200 ml toluollal összerázzuk, és a fázisokat szétválni hagyjuk. Az er-65 gometrint tartalmazó alsó fázist, amelynek tér-