155254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi kortikotropin szintézisére
155254 10 10 15 9. lépés: Aia-Gly-ONB-HBr (26—27) 4,0 g {9,6 mmól) védett dipeptidésztert (1. példa 8. lépés) feloldunk 5 ml jégecetben és 15 ml kb. 4 n jégecetes hidrogénbromidot adunk hozzá. Állni hagyjuk szobahőfokon, amíg a pezsgés megszűnik {kb. egy óra). Absz. éterrel kicsapjuk, eldörzsöljük, leszűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk. A nyers terméket (3,00 g) 20 ml etanolból átkristályosítjuk; 3,0 g (86%) szabad dipeptidésztert kapunk. Op.: Rfi = 0,6-—0,7. C12 H 15 0 5 ,N 3 • HBr (363,188). Számított C 39,80, H 4,45, N 11,61, Br 22,05%. Talált C 40,1, H 4,8, N 11,6, Br 22,25%. 10. lépés: Z-Asp(OBuO-Ala-Gly-ONB (25—27) 8 ml dimetüformamidban feloldunk 2,40 g (7,5 mmól) karbobenzoxi-/J-terc.butil~,aszparaginsavat, 2,70 g {7,6 mmól) dipeptidészter-bromni drá tot (1. példa 9. lépés) és 0 C°-ra hűtjük. Hozzáadunk 1,54 g (7,5 mmól) diciklöhexil-karbodiimidet és miután feloldódott, 1,04 ml (7,5 mmól) trietilamint. Kevertetjük egy órán át 0. C°-on, egy órán át szobahőn. Másnap á reakcióiélegyet bepároljuk, a maradékot feloldjuk etilacetátban és kirázzuk 1 n citromsavval, vízzel, 0 2 n kálium-karbonát oldattal, végül vízzel. Az oldatot nátrium-szulfáton szárítjuk, majd bepároljuk. A maradékot etilacetát-petroléterből kristályosítjuk: 2,3 g (64%) védett tripeptidésztert kapunk. Op.: 122—124 C°. Rf7 0,2—0,3. CagHaíOioNi (586,588). 11. lépés: Asp(OBuf )-Ala-Gly (26—27) 1,0 g (1,7 mmól) védett tripeptidésztert (1. példa 10. lépés) hidrogénezünk 15 ml metanolban csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végére a szabad tripeptid kiválik; ezt víz hozzáadásával ismét oldatba visszük, a katalizátort kiszűrjük, mossuk, a szűrletet bepároljuk. A kristályos maradékát átikristályosítj'Uk víz — aceton elegyéből. 0,40 g (74%) 194 C°on bomló tripeptidet kapunk Rf1 = 0,10—0,15. C13 H 23 O 0 N3 (317,38). Számított: C 49,20, H 7,30, N 13,24%. Talált: C 49,4, H 7,5, N 13,3 %, 60 12. lépés: Z-Asp^OBuO-Ala-Gly (25—217) 0,9 g (2,85 mmól) szalbad tripeptidet (1. pél- 65 25 30 35 40 45 50 55 da 1.1. lépés) feloldunk 25 ml 0 C°-os 5%-os nátrium-bikarbonát oldatban ós hidegen, keverés köziben (hazzacsepegtetünk 0,64 ml (3 mmól) kb. 80%-os kärbobenzoxikloridot. A reakcióelegyet addig keverteitjüfc szobahőfokon, aimíg a kromatográfiás vizsgálat szerint szalbad tripeptidet már nem tartalmaz (kb. 48 óra). Ekkor az oldatot kiéterezzük, megsavanyítjuk citromsawal pH 3-ig. A kivált olajat etilacetáittal extraháljuk, az egyesített etilacetátos extraktumofcat mossuk vízzel, szárítjuk, bepároljuk. A maradékot eldörzsöljük petroléterrel. 1,15 g (90%) amorf, védett tripeptidet nyerünk. Rf1 0,7—0,8. C21 H 29 O^Sr 3 (451,46). 13. lépés: 20 Z-AspíOBu^-Ala-Gly-GluíOBu^-AsptOBut)-Gln-Ser-Ala-GluiíOBu^-iA'la-Phe-Pro-Leu-Glu(OBut )-'Phe-OBu t (215—39) 342 mg (0,76 mmól) védett tiripeptidet (1. példa 12. lépés) feloldunk 5 ml dimetilfomiamidban és előbb 0,106 ml (0,76 mmól) trietilamint, majd —10 C hőmérsékleten 0,76 ml (kb. 0,76 mmól) klórszénsavetilésztert adunk hozzá. Keverteiijjük 15 percig, majd hozzéesepegtetjük 937 mg {0,55 mmól) dodekapeptid-klórihidrát (1. példa 7. lépés) és 0,077 ml (0,55 mmól) trietilamin dimetilformamidos oldatát (2,8 ml). A reakcióelegyet szöbahőfokon állni hagyjuk éjszakán át, majd vízzel hígítjuk, a kivált csapadékot mossuk vízzel, szárítjuk és mossuk éterrel is. A nyersterméket 45 ml metanol-10 ml víz elegyéből átoldjuk, szűrjük, szárítjuk: 80S mg (70%) védett pentadekapeptidet nyerünk. Rf4 0,(18—0,23. Rf 5 0,65-4),70. Cio3H15 403oNi6 (20196,39). 14. lépés: H-Arg(N02 )-Arg{N0 2 )-Pro-OH • HBr (17—19) 25 ml jógecetben feloldunk 6,5 g Z-Arg (N02 )-Arg(N0 2 )-Pro-OH védett tripeptidet [K. Sturm, R. Geiger, W. Siedel: Ber. 96, 600 (1963)] és 215 ml 4 n jégecetes brómhidrogént adva hozzá állni hagyjuk. A pezsgés megszűnte után 2100 ml éterrel kicsapjuk a tripeptid-brómhidrátot, az étert dekantaljuk, a csapadékot ilyen imődon mossuk éterrel és izo_ propanollal, végül szűrjük, izopropanollal a szűrőn is mossulk és szárítjuk. 5,4 g (90%) anyagot kapunk. Rf1 0,0, Biviz 0,5-^0,6. 15. lépés: Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-N2 H 3 (15—16) 8,6 g Z-iLys(BOC)-Lys(BOC)-OMe dipeptidésztert [R. Schwyzer és W. Rittel: Helv. Chim. 5
