155243. lajstromszámú szabadalom • Fermentációs eljárás 9-(béta-D-arabinofuranozil)-adenin termelésére

13 155243 14 kubációs hőmérsékletet az első fermentációs fokozatban 26—127 C°-ról 2i9—s3l0 C°-ra, a második fermentációs fokozatban 214—25,5 C°-ról 29—30 C°-ra és a végső fermentációs fokozatban 24,5—26,5 C°-ról 36—38 C°-ra növeljük. 5 3. példa: Tenyésztáptalajt készítünk, melynek összetétele a következő: 10 2,0 % 1,0 % -0,5 % 15 0,2 % 0,5 % 0,25% Glukóz-monohidrát Oldószerrel extrahált szójaliszt, i(44% protein) Állati pepton (Wilson's Protopepton 159) Ammóniuimklorid Nótriumklorid Kalciumkarbonát Vízzel 100%-ra kiegészítve. glukóz-ímonohidrát oldószerrel extrahált szójaliszt i(44% protein) nátriumklorid kalciumkarbonát vízzel 100%-ra kiegészítve. 20 A táptalaj pH-ját 10 n nátriumhidroxid oldattal 7,5 értékre állítjuk be. E táptalajból 12 litert beadagolunk egy 30 literes rozsdamentes acélból készült fermentorba. A táptalajt 90 percig ,121 C°-ra hevítve ste- 25 rilizáljuk, hagyjuk, hogy lehűljön és beoltjuk 40 ml olyan spóraszuszpenzióval, melyet az 1. példa első bekezdésében leírt módon készítettünk. A beoltott táptalajt ezután 29—30 C°-on 36 órán keresztül inkubáljuk, miközben 200 30 ford./perc sebességgel forgatjuk és 12 liter/perc levegőztetéssel keverjük. Ez idő alatt az intenzív habzás megakadályozása céljából kb. 44 g lardolajból és ásványi olajokból álló, mono- és diglicerideket tartalmazó keveréket adunk hozzá 35 adagokban. Ezután a következő összetételű tenyésztáptalajt készítjük el: 2,0 % 40 2,0 % 0,5 % 0,25% 45 A táptalaj pH-ját 10 n nátriumhidroxid oldattal 7,5 értékre állítjuk be. Ebből a második táptalajból 38 litert (10 gallon) beadagolunk egy 113 literes (30 gallon) 50 rozsdamentes acélból készült fermentorba. A táptalajt 60 percig 121 C°-ra hevítve sterilizáljuk, hagyjuk, hogy lehűljön és kb. 400 ml fent leírt fermentációs eleggyel beoltjuk. Hozzáadunk 150 ml habzásgátló keveréket, amely 55 lardolajból és ásványi olajokból áll és mono-és diglicerideket tartalmaz (pl. Swift's No. 51 jf| Inedible Defoaimer), tniajid az elegyet 2)9—30 M C°-on 24 órán át inkubáljuk 190 liter/perc (6,3 ""'" köbláb/perc) levegőztetés közben. 60 Ugyanolyan összetételű tenyésztáptalajból, mint amilyen a fent leírt 38 liternyi (10 gallon) oltótáptalaj volt, egy 1890 literes (500 gallon) „InconeP'-iburkolatú fermentorba beadagolunk 1135 liternyit (300 gallon). A táptalajt 10 n vizes 65 nátriumhidroxid oldattal pH = 7,5 értékre állítjuk be, majd 30 percig 121 C°-ra hevítve sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalajt 38 liter (10 gallon), közvetlenül az előbbiekben leírt fermentációs eleggyel oltjuk be és kb. 1000 ml, ugyancsak az előbbiekben leírt habzásgátló keveréket adunk hozzá. Az elegyet 30—31 C°-on 24 órán keresztül 84 ford./perc sebességgel történő forgatás és 1370 liter/perc (45 köbláb/pere) levegőztetés közben inkubáljuk. Ez idő alatt adagokban további 4000 ml habzásgátló keveréket adunk hozzá. 4540—4540 liter (11200 gallon) tenyésztáptalajt, melynek összetétele a fentiekben leírt 38 liter (10 gallon) és 1135 liter (300 gallon) táptalajéval azonos, beadagolunk két 7570 literes (2000 gallon) „Inconel"-burkolatú fermentorba. A táptalaj pH-ját mind a két f érmen torban 10 n vizes nátriumhidroxid oldattal 7,5 értékre beállítjuk, majd 30 percig 121 C°-ra hevítve sterilizáljuk. Lehűlés után mindegyiket beoltjuk 568 liter (150 gallon) olyan fermentációs eleggyel, melyet az előző bekezdésben írtunk le és mindegyikhez 10 liter habzásgátló anyagot adva 36,5—38 C°-on 144 óra hosszat inkubáljuk 125 ford./perc sebességgel történő forgatás és 31650 liter/perc (120 köbláb/ perc) levegőztetés közben. Ez idő alatt további 140—196 liter habzásgátlót adunk hozzá szükség szerint. A két fermentorból származó fermentációs elegyet egyesítjük, nyomólapos és keretes szűrőprésen át diatóma^föld segítségével szűrjük és a szűrési lepényt 378 liter ifllOO gallon) vízzel mossuk. A szűrletet és a mosóvizet egyesítjük, az egyesített oldatot csökkentett nyomáson eredeti térfogatának kb. 1/12-ed részére betöményítjük és a tömény oldatot 72 órán keresztül 5 C°-ra hűtjük. A hűtött oldatból kiváló szilárd anyagot diatóma-föld segítségével történő szűréssel elkülönítjük, a szűrési lepényt két ízben előbb 106 liter (28 gallon), majd 151 liter (40 gallon) forró vízzel extraháljuk és az egyesített vizes kivonatokat 72 órán keresztül 5 C°-ra hűtjük. A lehűtött oldatból kivált kristályos 9H(/?HD-arabinofuranozil)-adenint szűréssel elkülönítjük és kétszeri forró vízből történő kristályosítással tisztítjuk. Az első kristályosítást 106 liter (28 gallon) a másodikat 76 liter (20 gallon) vízből végezzük, az anyag olvadáspontja 262— 263 C°. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás 9-(ß-D-arabinofuranozil)-adenin termelésére, azzal jellemezve, hogy vizes tenyésztáptalajt beoltunk a Streptomyces antibioticusnak 9-(/?-D^arabinQfuranozil)-adenmt termelő törzsével és a beoltott táptalajt aerob körülmények között inkubáljuk. (Elsőbbsége: 1966. december 30.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az inkubálást 7