155202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikoheptin előállítására
155202 6 Papírkromatográfiás vizsgálatainkon kívül a K 456 jelű Streptamyces törzs fermentátumából kinyert fenti heptaén antibiotikumot ellenáramú megosztásos módszerrel hasonlítottuk össze az autentikus mikoheptinnel. 240-esöves 5 Liqiuofix-rendszerű automata készülékkel dolgoztunk. Az alkalmazott oldószer-rendszer kloroform, metanol és 8,35 pH-jú borátpuff er 2:2:1 arányú elegye volt. A megosztási idő 5 perc. A mikoiheptint és az amfoitericin JQ B-t (mindkettő nem aromás heptaén) hasonlítottuk össze a K 456 jelű Streptomyces törzs fermentátumából kinyert antibiotikummal. 200-lópéses, recirkulacios ellenáramú megosztás után az anifotericin B a 75-ös csőnél, a mikoíheptin és a K 456 jelű törzs fermentátumából elkülönített heptaén egyaránt az 55-ös csőnél adott maximumot. iFenti kísérleteink alapján a K 456 jelű Streptoimyces törzs fermentátumából izolált heptaén antibiotikum' azonos a mikoheptinnel. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákkal szemléltetjük: 1, példa: Streptomyces griseocarneusnak burgonyakivonat-glükózagaron a szokásos módszerrel termelt spóraszíuszpenzióijával beoltottunk 5 db 500 ml-es Erlenmeyer-lombikot, amelyek 10O ml alábbi összetételű táptalajt tartalmaztak: 2 % szójaliszt (zsírmentes) 3 % glükóz 0,2% íkuikoricalekvár 0,1% tripszinnel lebontott kazein 0^3% NAC1 0,5'% CaC03 . A pH sterilezés előtt 7,0. A táptalajt 20 percen át 12,1 C°-on sterileztük. A rázott kultúrákat 48 órán át tenyésztettük 28 C°-on síkrázógépen, és 40 liter hasznos térfogatú kísérleti üzemi fermentorokat oltottunk velük, melyekiben a táptalaj összetétele azonos volt a rázott kultúrákéval. A táptalajt 121 C°-on 30 percen át sterileztük. A fenti inokulummal beoltottuk a táptalajt, majd 28 C°-on tenyésztettük azt a szokásos módon, keverés közben. A tenyészeteket percenként 40 liter levegővel levegőztettük. A fermentátum a 72. órában 4:90 /ig/iml heptaén antibiotikumot tartalmazott. A 15 20 25 Z0 35 40 45 50 meghatározást spektrofotometriásán végeztük. A standardként alkalmazott saját preparátum elnyelése (nemzetközi standard hiányában) E 1 ^ m 383 mu-nál = 6O0. A fermentátum habzáisalkor orsóolajat adagoltunk halDzásgátlóként. Az összes beadagolt olaj mennyisége 0,5—1,0% között változott fermentációnként. 2. példa: 100 liter erjesztéséé oldatból (melynek aktivitása 0,490 g/liter és pH-ját 4,0-ra állítottuk oxálsav-oldattal) kiszűrt kb. 6 kg nedves micéliumot 20 liter 0,5i% kalciumkloridot tartalmazó metanollal extraháltunk. Az extra'ktumot szűrtük, majd vákuumban 20—40 C°-on metanol-mentesítettük. A 3—5 liter vizes maradékból kivált antibiotikumot szűréssel elkülönítettük, 250 'ml desztillált vízben szuszpendáltük, majd ismét elkülönítettük, végül 3X2100 ml éte-r-aeeton eleggyel (3 : 1) mostuk;, majd szárítottuk. A kapott nyers termék súlya 60 g. E 1 ° m 383 mu-nál = 300. Kitermelés 61,22%. Az így kapott nyers termék mintegy 30% pentaént is tartalmazott. 10 g így kapott, finoman elporított nyers mikoiheptint 50 C°-on 100 ml absz. etanollal 20 percig kevertettünlk a pentaén antibiotikum eltávolítása céljából. Az oldhatatlan maradékot (pentaén-tartalom 1—3%) ismét 50 C°-on 50 iml absz. etanollal 30 percen át kevertettük, majd az antibiotikumot elkülönítettük és szárítottuk. 1% A kapott tisztított termék súlya 3,9 g. E -• „^ 383 mu-nái = 6O0. Kitermelés 78% a nyers termékre vonatkoztatva. Szabadalmi igénypont: Eljárás mikoíheptin előállítására mikrobiológiai úton, azzal jellemezve, hogy a termelést a szokásos elöfermentáció közbeiktatása után a Streptomyceis griseocarneus törzzsel (az Országos Közegészségügyi Intézetnél 42:. számon 1967. december 22-én letétbe helyezve) végezzük komplex fehérjét, szénhidrátot és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon aerob fermentációs körülmények között, majd a fermentáció befejeződése után a mikoheptint a fermentátumból kiszűrt mioéliumfoól ismert módon elkülönítjük és tisztítjuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6907146. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 3
