155123. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroidok mikrobiológiai előállítására

155123 8 nem mutat olvadáspontcsökkenést. A két minta infravörös spektruma azonos. 2. példa: Az 1. példában leírt eljáráshoz hasonló módon kultúrát állítunk elő a Mycobacterium phlei KNGSF 7t5—S/53 törzsből. A főfermentációt három, egyenkint 500 ml-es lombikban folytatjuk le, 100—100 ml tápközeggel egy-egy lombikban. Ebben az esetben is 5% inokulumot alkalmazunk, a főfermentáció közegének mennyiségére számítva. A lombikokat a szokásos módon rázatjuk és 48 órával az inokulálás után 200—200 mg koleszterint adagolunk mindegyik lombikba, 50—50 mg NiS04-7H2

0 hozzáadásával, majd a rázást folytatjuk. Három nap múlva a három lombik együttesen 188,9 és 236 mg között változó mennyiségű l,4-«androsztadién^3,T7-<diont tartalmaz, rendszerint csekély mennyiségű 4-androsztén-i3,17-dion kíséretében. A termelési hányad e beadagolt koleszterin mennyiségére számítva 42,'8% és 53,56% között változik. 3. példa: A 2. példában leírthoz hasonló eljárással Mycobacterium phlei KNGSF 70 törzsből készítünk inokulumkultúrát, és a főfermentációt is az ott leírt módon készítjük elő. Mindegyik lombik tartalmához azután 400 mg koleszterint adunk; négy nap múlva 93 mg l,4-androsztadién-3,!l7j

dion különíthető el az 1. példában leírt módszerrel. Az át nem alakult kiindulóanyag mennyisége az egyes lombikokban 2,30 mg-ig megy. így általában 170 mg koleszterin került átalakításra egy-egy lombikban, e mennyiségből elméletileg 124 mg 1,4-androsztadién-3,:17-dion lenne nyerhető. Ezekből az adatokból kitűnik, hogy a konverzió hozama az átalakított koleszterinre számítva 75%, a beadagolt eredeti koleszterin-mennyiségre számítva pedig 31,6%. 4. példa: A 2. példában leírthoz haconló módon dolgozunk, Mycobacterium butyrieum ATCC 11314 törzset alkalmazva. Az 1. példában leírt módszerrel elkülönítve és tisztítva a kapott terméket, a háromnapi rázatás után az egy-egy lombikból nyert l,4-androsztadién-3,17-dion menynyisége 30 mg, ami a beadagolt koleszterinre számítva 20,4%-os termelési hányadnak felel meg. 5. példa: Mycobacterium phlei KNGSF 70 törzzsel dolgozunk, a 2. példáiban leírthoz hasonló módon. Koleszterin helyett azonban mindegyik lombikba 400—400 mg béta-szitoszterint adagolunk. Négy napi rázatás után, az 1. példában leírt elkülönítési és tisztítási eljárással 37 mg 1,4--androsztadién-3,17-diont kapunk egy-egy lombikból. Ez a mennyiség a betáplált béta-szitoszterin mennyiségére számítva 13,5%.-os terme-5 lési hányadnak felel meg. 6. példa: A 3. példában leírthoz hasonló módon dolgo-10 zunk, de azzal az eltéréssel, hogy mindegyik lombikhoz 400—400 mg sztigmaszterint adunk. Három nap múlva vékonyrétegű kromatografálással, az 1. példában leírt módon kimutatható az l,4-androsztadién-3,il7-dion jelenléte. 15 7. példa: Mycobacterium phlei KNGSF 70 törzsből készítünk kultúrát a 3. példában leírt eljárással, 20 a kultúrához azonban 50 mg nikkelszulfát helyett ugyanilyen mennyiségű kobaltkloridot adunk mindegyik lombikba. 30 C°-on történő kétnapi rázatás után vékonyrétegű kromatográfiával kimutatható az l,4-andirosztadién-3,17-25 -dión és 4-androsztén^3,17-dion jelenléte. 8. példa: A 7. példában leírthoz hasonlóan dolgozunk, 30 azzal az eltéréssel, hogy nikkelszulfát helyett 5 mg kadmiumszulfátot adunk mindegyik lombik tartalmához. Egynapi rázatás után vékonyrétegű kromatografálással már ki lehet mutatni l,4-androsztadién^3,17jdion és 4-androsztén^3,17-35 -dión jelenlétét. Ezenkívül -még két másik, ismeretlen folt is látható a kromatogrammon, amelyek pozitív Zimmerman-reakciót mutatnak. A termék mennyiségét oly módon határozhatjuk meg, hogy a folyadékot metilizóbutilketon-40 nal extraháljuk és a kivonatot papíron kromatograf áljuk for mamiddal telített 5 :4 arányú benzol-heptán rendszerrel, majd a megfelelő foltot metanollal eluáljuk és a termék extinkcióját 244 millimikron hullámhosszon „Unkám" 45 spektrofotométerrel mérjük. Az egyes lombikokban az 1,4-androsztadién-3,17-dion és 4-and:rosztén-3,17-dion elegyének mennyisége 29,4 mg, ami a hozzáadott koleszterin mennyiségére számítva 10% termelési há-50 nyadnak felel meg. 9. példa: A 7. példában leírthoz hasonló módon dolgo-55 zunk, azzal az eltéréssel, hogy nikkelszulfát helyett 50 mg ólomadetátot adunk mindegyik lombik tartalmához. Kétnapi rázatás után máiszámottevő mennyiségű l,4-androsztadién-3,17--dion jelenléte mutatható ki vékonyrétegű kro-60 matográfiás módszerrel. 10. példa: A 7. példában leírthoz hasonló módon dolgo-65 zunk, azzal az eltéréssel, hogy a nikkelszulfát 4