155081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az enduracidin antibiotikum előállítására
155081 13 14 nít j ük. A csapadékot éterrel mossuk. Az így kapott nyers enduracidin 5000—-10000 E/mg antibiotikus aktivitást mutat Staphylococcus aureus mikroorganizmussal és ugyancsak 5000— 10 000 E/mg aktivitást Bacillus subtilis mikro- 5 organizmussal szemben. A kapott nyers termék további tisztítására az alábbi eljárás ajánlható: Nyers terméket vizes savas oldatban egy aktívszénnel töltött és előzetesen savval kezelt oszlopon vezetjüik keresztül, majd gyengén bázisos ioncserélő gyantával (Atmberlite IR—4b, IR—45 stib.) kezeljük az oldatot a sav eltávolítása végett. Az így kezelt oldatot azután betöiményítjük vagy fagyasztva szárítjuk, a hatóanyag tiszta állapotban való' kinyerése céljából. Az így kapott hatóanyagot további tisztítási műveleteknek is alávethetjük, vagy hidrökloriddá alakíthatjuk át, pl. a következő módon: a .hatóanyagot metanolos sósiavoidatban oldjuk, majd az oldatot egy savval előzetesen kezelt aktívszénnel töltött oszlopon vezetjük át, azután szoibalhőlfokon betöiményítjük az így kezelt oldatot. A kapott koneentrátumot aceton és éter elegyével kezeljük, majd állni hagyjuk, azután a levált kristályos por alakú enduracidin-hidrokloridot elkülönítjük. Ez a poir alakú termék vízben és metanolban oldódik és mind Staphylococcus aureus, mind Bacillus subtilis mikroorganizmusokkal szemben 10 000—15 000 E/mg antibiotikus aktivitást mutat. A fenti módon kapott por alakú tenmók 20— 50%-os vizes metanolos oldatát egy gyengén bázisos ioncserélő gyanta-oszlopon vezetjük keresztül és a távozó folyadékhoz n-butanolt adunk, majd a vizet és a metanolt ledesztillálj uk. Az ily módon tisztított enduracidin fizikokéimiai és .biológiai tulajdonságai az alábbiak: 1. Elemi analízis: Az enduracidin elemi összetétel szempontjából C, H, N, P és Cl atomokat tartalmaz. 0% Ho/0 szabad bázis 53,2+0,5 6,54 + 0,3 hidroklorid 49,7+0/5 6,29 ±0,3 N% Cl% 14,45+0,5 3,36 + 0,5 13,51 ±0,5 9,42+0,5 í(A szabad bázist az aláblbiaklban egyszerűség kedvéért „A", a hidrokloridot pedig ,B" megjelöléssel ^említjük, a kétféle termék tulajdonságainak irészletes isrneírtetése során.) A szalbad bázis 3,'36+j0,5% klóratomot tartalmaz molekulájában. A fentemlített kb. 3,36+0,5% klórtartalom erős ionos kötéssel vagy kovalens kötéssel kötődik a molekulákhoz, bár e kötés pontos természetét még nem sikerült felderíteni. A hidroklorid további 2> mól klórt tartalmaz, a szabad bázis klórtartalmához viszonyítva. 2. Molekulasúly és szerkezeti felépítés: Ha az enduraciidint 6 n sóisavoldattal 110 C hőmérsékleten 6—48 óra hosíszat hidrolizáljuk, akkor oly elegyiet kapunk, amely treonint, szerint, glicint, alanint és aszparginsavat, továbbá némi nmhidrin-pozitív anyagot és meghatározatlan, Sakagudhi-reagenssel kék vagy ibolyakék színreakciót adó anyagot tartalmaz. E meghatározatlan anyagok közé olyanok tartoznak, amelyek ninhidrinnel előbb sárgásbarna, sárga vagy ibolya színreákciót adnak, ezek a színek azonban szotoahőfofcon való állás folyamán mind ibolyaszínűre változnak; az ilyen anyagok mennyisége a hidrolízis mértékétől függően változik. A fenti jellemző tulajdonságok alapján az enduracidin új, bázisos peptid-típusú antibiotikumnak tekinthető. Másrészről, az enduracidin 50%-os metanollal készített oldatának n/10 sósavoldattal való titrálása során kapott semlegesítési görbe azt mutatja, hogy az enduracidin disszociációra képes bázisos csoportokat tartalmaz molekulájában. A megadott klórtartalom alapján számítva, az enduracidin .minimális molekulasúlya kb. 10i5ö-nek adódik, ezért az enduracidin molekulasúlya (1000'—'l'l'0O)n értékkel adható meg, ahol n valamely egészén. 3. Fajlagos forgatóképesség. A: {a:p3D = +850 +10° (C = 0,5, dimetilformamidban) B: [a]23D = +70 o +10° (c = 0,5, vízben) +80° +10° (c = 0,5, metanolban) 4. Abszorpciós színkép: Az enduracidin ibolyántúli abszorpciós színképét a szabad vegyületre vonatkozólag az 1. ábra, a hidrokloridra vonatkozólag pedig a 4. ábra mutatja. A megfigyelt lényeges maximális abszorpcióértékek a következők: 15 20 25 S0 35 40 45 50 55 60 Eljárhatunk oly módon is, hogy a fentemlített porszerű tenmék vizes oldatát 8—8,5 pH-értékre állítjuk, majd az így kezelt oldatot n-lbutanollal extraháljuk és a butanolos 45 kivonatot betöményítjük. A fenti módszerek 'bármelyike szerint kapott betöményített oldathoz étert adunk, aminek hatására szabad állapotban kiválik az enduracidin. 50 T
