154812. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy pentakozapeptid előállítására
13 154812 14 acetátot, majd 38 g nátriumnitritet (3 adagban) adunk hozzá. Állandó keverés közben —10°-on még 5 percig reagáltatjuk. Az etilacetátos fázist elválasztjuk, hideg 10%-os káliumhidrogénkarbomát oldattal mossuk, -és nátriuimszulfát fölött megszárítjuk. A száraz oldathoz 13 g H-Tyr-Ser-,Nle^OMe-lhidrokloridnak 60 ml dimetilformaimiddal és 0 ml trietilaminnal készült oldatát adjuk. Ezután az etilaoetátot vákuumban elpárologtatjuk, és a maradványt 16 óra hoszszat 20°-on állni hagyjuk. A visszamaradt oldószert vákuumban elpárologtatjuk, és a maradványt etilacetátban oldjuk. Híg (fosziforsawal és káliuimhidrogénkarbonát oldattal mossuk, és nátriuimszulfát fölött (megszárítjuk. Az oldószer elpárologtatása és éterrel való kicsapás után 15 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-íNle-OMe-t kapunk 135° olvadásponttal. [a]20D— —'6° metanolban. 11 g CTBJD-Ser-Tyr-Ser-Nle-OMe-t feloldunk 100 ml metanolban, és hozzáadunk 45 ml hidrazinhidnátot. Éjjelen át 20°-on állni hagyjuk, mire a termék kikristályosodik. Szűrőire visszük és metanollal és petroléterrel mossuk. 7,7 g CTB-D-JSer-Tyr-Ser-,Nle-hidrazidot kapunk 210° olvadásponttal. [a]20 o = +6,4° dimetilformamidban. 5. példa: D-szeril-L-tirozil-L-szeril-L-norleucil-L-glutamil-L-hisztidil-L-fenilalanil-L-iarginil-L-tiripitofanil-glicil-L-lizil-L-prolil-L-valiliglicil-L-lizil-L-lizil-L-arginil-L-arginil-L-'prolil-L-j valil-L-lizil-L-valil-L-tirozil^L-prolil-L-valinaniid (D-Ser-Tyr--Ser^Nle-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lysj Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-ValHNH2 ). 2,0 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-,NHiNH.2 -ot (4. példa) feloldunk 12 ml dimetilforimamidban, 4 ml vizet adunk hozzá, —10°-ra hűtjük, 2 ml 6 n sósavat adunk hozzá, majd 280mll náitiriumnitritet, 5 percig —5°-on keverjük, majd hozzáadunk 300 ml 0,2 n káliumhidrogénkarbonát oldatot, és centrifugáljuk. A kapott CTB-D-Ser-Tyr-Seir-Nle^N3-ot feloldjuk 50 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 10,5 g H-Glui(OTB)-i(Trit)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-Val-Glyj(CTB)Lys-(CTB)Lys-Arg-Arg-Pro-ValH(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-iNH2 • acetátot, 12 óirahoszszat 0°-on állni hagyjuk, hozzáadunk további 2,0 g iCTB-D-Ser-Tyr-Se!r^Nlie-!NH!NH2 Jból előálhtott tetrapeptidazidot, 6 óra hosszat 0°-on állni hagyjuk, bepároljuk, etilacetáttal feldolgozzuk, forró acetonnal és etilacetáttal mossuk, és vákuumban megszárítjuk. A kapott terméket feloldjuk 100 ml 90%-os trifluorecetsavban, 1 óra hosszat 20°-on nitrogénatmoszférában állni hagyjuk, bepároljuk, etilacetáttal feldolgozzuk, leszűrjük, és megszárítjuk. A kapott terméket feloldjuk 500 ml 0,2 n ecetsavban, az oldatot acetátfázisú Amberlit—IRA—410-zel kezeljük, szűrőre visszük, és a szűredéket liofilizáljuk. A nátriumhidroxid fölött való ímegszárítás után 7,5 g H^D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Vál-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Viail-ilNÍH2 — heptaacetát-dekahidrátot kapunk. A termék kromatografáláskor és élektroforizálvá homogénnek bizonyul. Teljes hidrolízis a következő aminosavösszetiételt mutatja: Ser1 , 9 Tyr 1 , 9 iríléi,iGlUj , 0 Hisi, 0 Phe1 , 1 Arg3, 1 Gly2,oLys4, 1 PrÓ3,oVal3,9. Mikroanalízis: számított: C 51,0, H 7,5, N ,16,5!, O 24,4%, talált: C 512,1, H 7,5, N 15,6, Ö 24,8%. Olvadáspontja bomlás közben 200°. [a]20 o = = —$0° n ecetsavban. 6. példa: Egy ampulla tartalmának 'összetétele: 25 peptidegység mg-ként ecetsav, tömény, kb. 0,0011 g nátriuimacetát-trihitirát 0,002 g nátriumklorid 0,007 g benzilalkohol 0,009 g vízzel kiegészítve 1,005 g-ra. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a D-szeril-L-tirozil-L-szeril-L-norleudl-L-glutaimil-L-lhisztidil-L-fenilalanil-L^arginil-L-triptotfaml-glicil-L-hzil-L-prolil-L-valil-gli-cil-L-lizil-L-lizil-L-arginil-L-arginil-LMprolil-L-vahl-L-lizil-L^valil-L-tirozii-L-prolil-L-valmamid eddig ismeretlen pentakozapeptid, savaddiciós sói és ndhézfémkómplexei előállítására azzal jellemezve, hogy peptidegységék kialakításával felépítjük a fenti képletű pentákozapeptidnek megfelelő védett polipeptidet, ebből a védőcsoportokat egy vagy több lépésben eltávolítjuk, 'majd adott esetben az így kapott pentakozapqptidet önmagában ismert módon átalakítjuk szerves vagy szervetlen savakkal alkotott addíciós sóivá vagy nehézfémkomplexeivé. 2. Az 1. igényipont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy célszerűen a reakcióban részt nem vevő amino- és hidroxilcsoportok védelme alatt a Djszeril-L-tirozil-L-szeril-L-norleucin tetrapeptidet vagy ennek egy aktivált .végállású kairboxilcsoporttal rendelkező származékát és az L-glutamil-L-lhisztidil-L^fenilalanil^L-arginil-Lj triptofanil-glicil-L-lizil-Lnprolil-L-valil-glicil-L-lizil-L-lizil-LHarginil-L-arginil-L^prolil-L^valil-L-lizil-L-valil-L-tirozil-L-iprolil-L-valiniamido(t vagy ennek a heneakozapeptidneik egy aktivált a-aminocsoporttal rendelkező származékát kondenzáljuk, a kondenzáció befejeztével a védett aminocsoportokat és kariboxilesoportokat felszabadítjuk, és ha kívánatos, a kapott pentakozapeptidet átalakítjuk sóivá vagy náhézfémkomplexeivé. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy L-valil-^-10 15 20 25 ít 35 40 45 50 55 60 '7
