154453. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cserzőanyaggal kezelt, eritrociták stabilitásának fokozására és tablettázot eritrocita-készítmények előállítására
154453 4 rociták kevésbé instabilak és könnyen liofilizálhatók; liofildzált állapotban már eléggé huzamos ideig tárolhatok is. Szükség van azonban olyan előkészítési módra, amely lehetővé teszi az eritrociták egyszerű módon való kezelését és egyidejűleg kellő stabilitást biztosít ahíhoz, hogy íaz ilyen eritroeita-készítmény megtartsa 'huzamos ideig mindazokat a tulajdonságait, amelyek lényegesek az immunokémiai meghatározások sikeres elvégzéséhez. Meglepő módon azt találtuk, hogy ha az egyvagy többféle cserzőanyaggal, ill. pácolószerrel kezelt aritroéitákíat megszárítjuk és ilyen állapotban 30' C° feletti hőmérsékletre melegítjük, akkor -mechanikai tulajdonságaik olymértékben javulnak, hogy az így kezelt eritrociták tablettákká sajtolhatok és ilyen alakban is megtartják az immunokémiai reakciók szempontjjából lényeges tulajdonságaikat; az ilyen tabletták újbóli szuszpendálásuk után kitűnően használhatók segédanyagként immunokémiai reakciókhoz. Azt találtuk továbbá, hogy ez az eljárás az olyan eritrodrbákfcal is alkalmazható, amelyeket cserzőanyaggal vagy pácolószertrel való kezelés után valamely antigénnel érzékenyítettünk. Az említett hőkezelésnek nincs káros hatása az antigén kötődésre, sem pedig az ilyen eritroeitákkal végzett immunokémiai meghatározások eredményeire; így ezek a tabletták teljes mértékben használhatók az említett célra. A részecskék stabilitása is igen előnyös a fentemlített kezelés Után, ha a kezelést az eritrociták és a tafolettázáshoz és/vagy az immunokémiai megbaitározásfaoz felhasználásra kerülő egy?- vagy többféle segédanyag keverékével végezzük. Ilyen segéd anyagként pl. szacharóz, nátriumkloriid és foszfátok alkahnazihatók, ezek 'határozott védőhatást fejtenek ki a hőkezelés során. Különösen a HOG-vel érzékenyített eritrociták immunokémiai tulajdonságai mutatnak kitűnő stabilitást szacharóz alkalmazása esetén. Az ilyen segédanyagok fajtájának és mennyiségének megválasztása függ az elvégzendő hőkezelés módszerétől» és hőmérsékletétől, a felhasznált antigén fajtájától és a szándékolt meghatározási módszertől is. A magasabb hőmérsékleten történő kezelés különböző módokon végezhető», pl. olymódon, hogy előbb közönséges vagy csökkentett nyomáson megszárítjuk az eritroqütátkait (pl. liofilizálással), majd ezután végezzük a hőkezelést; előnyösen azonban egyidejűleg végezhető ez a kétféle kezelés, pl. olymódon, hogy a kezelendő részecskék vizes szuszpenzióját egy felmelegített száraz gázáramba porlasztjuk be (porlasztásos szárítási módszer). Jó eredményekét kapunk a magasabb hőmérsékleteken végzett fluidizálás módszeréivel is. Erre a célra az eritrocitarSzuszpenzíót előbb liofilizáljuk, majd a részecskéket egy hevített száraz gázáramba, visszük be, amely gázáram felfelé halad elegendő sebességgel ahhoz, hogy a részecskéket a hőkezelés során lebegve tartsa. A hőmérséklet 50 C° és 120 C° között lehet; kb. 10 perctől kfo. 1 percig tartó (a hőmérséklettől függően) hőkezelés legtöbbnyire elegendő a kí-5 vánt eredmény elérésére. Előnyösen 5 perces hőkezelést alkalmazunk 75 C° hőmérsékleten. A fluidizálási módszer előnye, hogy a kezelés során a részecskéik hőmérsékletét igen szűk határok között (kb. ,2 C°) szabályozhatjuk. E ke-10 zeléshez előnyösen üveg- vagy alurníniumhengeirt használunk. A fentebb említett porlasztásos szárítási módszer azonban egyszerűbb és különösen ipari méretű termelés esetén alkalmazható előnyösen. 15 Előnyös, ha az eritrocitálkat a hőkezelés során mozgásban tartjuk; a porlasztásos szárítás és a fluidizálási módszer esetélben ez a mozgatás a módszer lényegéből következik és így önmagától biztosítva van, másfajta hőke-20 zelési módszerek, pl. hősugárzás alkalmazása esetén azonban külön gondoskodni kell a részecskék mozgatásáról, pl. hang-vibrátor segítségével. A találmány körébe tartozik az érzékenyí-25 tett Vagy érzékenyítetlen eritrociták tablettázott vagy más adagolható szilárd késziítménynyé való alakítása is; ezt az eljárást az jellemzi, hogy a találmány szerinti módon kezelt eritrocitáfcait a talMettázáshoz és az immu-30 nokémiai meghatározáshoz még szükséges további segédanyagokkal keverjük, majd tablettákká sajtoljuk. Az így készített tabletták előnye a szuszpenzióikkai szemben, hogy lényegesen könnyebben kezelhetők és adagolhatok, 35 az eritipciták ilyen alakban stabilabbak és a készítmény kevesebb helyeit is foglal el. „Ni.ro" gyártrnányú porlasztószárító-berendezés .alkalmazása esetén azt tapasztaltuk, hogy jó eredményekéit érünk el, ha a belépési 40 hőmérséklet 75-—MO C°, előnyösen 120—130 C°, a kilépési hőmérséklet pedig 50—80 C°, előnyösen kb. 75 C°. Általiéban azt mondhatjuk, hogy az, említetteknél alacsonyabb hőmérséklet alkalmazása .ecetén túlságosan hosszú 45 kezelési időre van szükség, Ha viszont az említetteknél magasabb kezelési hőmérsékletet alkalmazunk, akikor megnövekszik az eritrocitáfchoz kötődő antigén bomlásának, valamint esetleg az alkalmazott segédanyagok bomlásá-50 nalk vagy megolvadásának veszélye, ami hátrányos követkernényekkiel járhat a készítmény gyakorlati felhasználása szempontjából. Ügy találtuk, hogy .2 tf/tf% és 10 tf,tf0 ' 0 55 közötti koncentrációjú eritro cita-szuszpenziókkal igen jó eredményeiket kapunk porlasztásos szárítással történő kezelés esetén. Különösen kiváló eredményekéit kaptunk kb. 2t—3%-os koncentrációik esetén. A porlasztás sebessége 60 előnyösen percenként kb. 20J3 csepp (10 ml szuszpenzió) lehet. Az említett kezelés során száraz levegő, közömbös gáz vagy gázelegy alkalmazható, különösen előnyösnek bizonyult a nitrogén alkal-65 mazása erre a célra. 2