154327. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikum előállítására
154327 II. táblázat Az A3823 antibiotikum aktivitása négyféle Coccidia-fajtával szemben Kórokozó Gyógyszerszint a takarmányCsirkék ban szama súlyo/o 0,02 19 kontroll 50 0,02 30 kontroll 50 0,02 50 kontroll 50 0,02 20 kontroll 20 Mortalitás % Súlygyarapodás g 0 1788 36 133 0 4128 48 —98 0 8500 0 7100 0 1498 0 935 Eimeria tenella Eimeria necatrix Eimeria maxima Eimeria Brunetti peritoneális beadásnál az LD50 érték kb. 16,8 ±1,7 mg/kg testsúly. Az antibiotikum csirkéken még sokkal kevésbé toxikusnak mutatkozik, ezeknél az állatoknál orális beadás ese- 25 tén az akut toxikusság, ismét LD50 értékben kifejezve kb. 284,45 ±47,22 mg/kg testsúly. Az új antibiotikum előállítása a találmány értelmében egy új, általunk felfedezett Actinomyces-törzsnek megfelelő tápközegben, aerob SO körülmények között történő tenyésztése útján megy végbe; a mikroorganizmus tenyésztését addig folytatjuk, míg a tápközegben az antibiotikum számottevő koncentrációban nem gyülemlik fel. Az így termelt antibiotikumnak 35 a kinyerése különböző, a szakmabeliek által ismeretes elkülönítési és tisztítási műveletek útján történik. E műveletek segítségével az új antibiotikumot viszonylag tiszta állapotban kapjuk. Olyan esetekben, amikor az új antibioti- 40 kumokat állatok számára takarmánykiegészítőként kívánjuk alkalmazni, kisebb mértékű tisztítás is elegendő. Ilyen esetékben nem is szükséges az új antibiotikumot szilárd alakban kinyerni, hanem kívánt esetben olymódon is el- 45 járhatunk, hogy az antibiotikum koncentrált oldatát a takarmányra, mint hordozóanyagra permetezzük. Az A3823 antibiotikumnak a találmány szerinti módon való termelésére alkalmazott mik- 59 roorganizmus-törzset az American Type Culture Collection (Washington, D. C.) intézetnél helyeztük állandó letétbe, ahol azt az ATCC 15 413 sz. alatt vették nyilvántartásba. A Streptomyces-fajú mikroorganizmusokkal 5 c folytatott taxonómiai viszálatokkal járó bizonytalanság folytán az újonnan felfedezett ilyenfajta mikroorganizmusok osztályozásához mindig bizonyos kétségek férnek. Az A3823 antibiotikumot termelő törzs azonban legfontosabb 60 jellemző tulajdonságai szempontjából igen nagy mértékben hasonlít a Streptomyces cinnamonensis Okami (NRRL B1588) mikroorganizmusra és e mikroorganizmus egy új törzsének tekinthető. Az általunk felfedezett új S. cinnamonen- g5 sis törzs és az eddig ismert törzs között azonban eléggé nagy különbségek állnak fenn ahhoz, hogy az itt leírt mikroorganizmust új törzsnek minősíthessük. E kétféle törzs a spóralánc és a spóra morfológiája, a termelt légmicélium és vegetativ micélium színe, valamint az oldható pigment termelése szempontjából hasonlít egymásra. Különbségek állnak azonban fenn a kilencféle szénforrás hasznosítása tekintetében, továbbá abban, hogy a S. cinnamonensis (NRRL B1588) törzs hidrogénszulfidot termel, a találmány szerinti eljárásban alkalmazott új törzs viszont nem; a legnagyobb különbség azonban a két törzs hőmérséklet-igénye szempontjából mutatkozik. így a S. cinnamonensis (NRRL B1588) törzs legnagyobbfokú fejlődést és sporulációt 26 C° hőmérsékleten mutat, míg 30 C°-on csak gyenge sporuláció következik be. 37 C°-on a mikroorganizmus fejlődése még folytatódik, de sporuláció nélkül, míg 43 C° hőmérsékleten a fejlődés is teljesen megszűnik. Ezzel szemben a jelen találmány szerinti eljárásban alkalmazott S. cinnamonensis ATCC 15 413 törzs a legnagyobbfokú fejlődést és sporulációt 30 C° és 37 C° közötti hőmérsékleten mutatja. 43 C°-on még jó növekedés tapasztalható, bár a sporuláció gyenge; ezen a hőfokon az eddig ismert törzs már egyáltalán nem fejlődik. Az A3823 antibiotikumot termelő mikroorganizmust egy talajmintából különítettük el, a talaj részecskék steril desztillált vízben való szuszpendálása és a szuszpenzió ágár-táptalajra való felkenése útján. Az így beoltott ágár-lemezeket 25—35 C° hőmérsékleten inkubáltattuk látható kolóniák kifejlődéséig. Az inkubációs időszak befejeztével, az antibiotikumot termelő mikroorganizmus kolóniáit steril platinakacs segítségével, ferde agárra vittük át. Ezen inkubáltattuk a mikroorganizmust, az A3823 antibiotikum termelésére alkalmas mennyiségű inokulum-kultúrák kifejlődéséig. A S. cinnamonensis ATCC 15 413 mikroorganizmus A3823 antibiotikumot termelő törzsének taxonómiai vizsgálatára az Actinomyces-fa-3
