154246. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,2-dehidroszteroidok előállítására

154246 4. példa: Kétnapos KA12

tenyészetet desztillált vízzel 10-szeresére hígítottunk, majd 5 l-es fermentorban hígított tenyészethez 1 g IVa-metiltesztoszteront adtunk 50 ml aoetonban oldva. A tenyészetet 2l8 C°-on inkubáltuk 300/perc fordulatszámmal kevertetve, percenként 5 1 levegő átáramoltatása mellett. Az oxidáció előrehaladását tioszemikarbazonos módszerrel mértük, majd a 4. táblázatban látható meghatározási adatok alapján a fermentációt a 13. órában befejeztük. adatok alapján a fermentációt a 12. órában fejeztük be. Tenyészet kora órákban 0 4 8 12 4. táblázat 17or-metil- 1-dehidro-metiltesztoszteron tesztoszteron Hg/ml /Mg/ml 196 112 24 0 0 78 148 180 A fermentlét 3x1/12 térfogat diklóretánnal extraháltuk. Az egyesített extraktumot vákuumban bepároltuk. A kapott nyers termékből etilacetátos kristályosítással 605 mg 17a-metil-androszta-l,4-dién-17^-ol-3-ont nyertünk. Op. 164— 167°; [a]D

=

+10°, <c = l,95%r-os etanol); Xmax 245 m/x-nál: E{%

cm

= 515. 5. példa: Kétnapos KA12

tenyészetet desztillált vízzel 10-szeresére hígítottunk, majd 5 1 hígított tenyészethez fermentorban 1 g hidrokortizont adtunk 20 ml 10% CaCl2

-tartalmú metanolban oldva. A tenyészet inkubálása, valamint az analitikai követés a 4. példában leírtak szerint történt. Az 5. táblázatban közölt meghatározási 10 15 20 25 30 35 40 Tenyészet kora órákban 0 4 8 1.2 5. táblázat Hidrokortizon Prednizolon }ig/ml í^g/ml 190 l!00 42 0 10 98 148 1:93 A fermentlevet 3 x 33 térf.% etilacetáttal vontuk ki az átalakítás befejezése után. A kivonatokat egyesítés után vízmentes nátriumszulfáttal szárítottuk, majd bepároltuk. A maradékot etilacetátból átkristályosítottuk. 0,76 g (76%) prednizolont kaptunk; op.: 235 C° (bomlás közben); HD

=+100°,

(C=>1, dioxán); 2^°H

= = 242 mjx-nál Ef§m — 415. 6. példa: Corynebacterium equi egyhetes, burgonyás ferdeagaron nőtt tenyészetéből 8 ml steril desztillált vízzel szuszpenziót készítettünk és ebből 1_1 ml-rel oltottunk 100—100 ml steril SA5

_

g jelű táptalajt 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban. A beoltott lombikokat 28 C°-os termosztát szobában rázattuk, inkubáltuk 48 óra hosszat. Az így nyert tenyészet 100 ml-óhez az 1. lombiknál 20 mg 17a-metiltesztoszteront, a 2. lombiknál 20 mg ll

7a-metiltesztoszteront és 2 mg ^-naftolt adagoltunk. További inkubálás . és analitikai követés az 1. példában leírt módon történt. Az eredményeket a 6. táblázatban közöljük. 6. táblázat Tenyészet kora órákban 0 3 6 9 1. lombik 17«-metil-teszt oszteron Mg/ml 187 32 0 0 1 -dehidro-metiltesztoszteron Mg/ml 0 145 112 9 2. lombik 17«-metil-teszto- 1 -dehidro-metilszteron tesztoszteron jug/ml fig/nú 193 45 5 0 0 129 181 160 A 6. táblázat adatai szerint a ß-naftol a hasznos 1,2-dehidro-metiltesztoszteron termék lebontását a dehidrogénezés befolyásolása nélkül megakadályozza. Szabadalmi igénypontok: <1. Eljárás A ^szteroidok előállítására mikrobiológiai oxidációval, azzal jellemezve, hogy az oxidációt Corynebacterium equi VB jelű mikroorganizmussal végezzük, és a keletkezett 1,2-de-60 hidroszteroidot önmagában ismert módszerekkel elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt Corynebacterium equi vízzel 8—10-szeresre 65 hígított tenyészetével végezzük. 4